2025-07-02
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柱前衍生同時分析18種氨基酸
詳詢:天津譜祥科技-劉工
樣品信息:
18種氨基酸 出峰順序依次為1--天冬氨酸ASP、2--谷氨酸GLU、3--絲氨酸SER、4--谷氨酰胺Gln、5--組氨酸HIS、6--甘氨酸GLY、7--蘇氨酸THR、8--瓜氨酸CIT、9--精氨酸ARG、10--丙氨酸ALA、11--色氨酸TYR、12--半胱氨酸CYSTINE、13--纈氨酸VAL、14--蛋氨酸MET、15--苯丙氨酸PHE、16--異亮氨酸ILE、17-亮氨酸LEU、18--賴氨酸LYS
檢測目的:在線柱前衍生分析18種氨基酸
檢測原理:
島津prominence 20A UFLC系統(tǒng)升級后,可以在定量環(huán)內(nèi)實現(xiàn)柱前在線衍生。
衍生時,進(jìn)樣針首先吸取硼酸buffer到定量環(huán)(硼酸buffer pH值7.0,在堿性條件下衍生效果更好)----再吸取OPA和3-巰基丙酸的混合液(OPA衍生一級胺,3-巰基丙酸保護(hù)氨基酸),----再吸取FMOC(FMOC衍生二級胺)----zui后吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液---混合充分反應(yīng),進(jìn)樣分析。
檢測方法:標(biāo)準(zhǔn)品儲備液,稀釋后衍生進(jìn)樣分析
分析儀器:島津prominence 20A UFLC系統(tǒng)
液相色譜條件:
色譜柱: | Inertsil ODS-4 3um 4.6*150mm 貨號:5020-04045 |
流動相: | A:水(40mM磷酸鹽,Ph7.0) B:乙腈/甲醇/水=45:45:10 |
流速: | 1.0ml/min |
柱溫: | 40℃ |
檢測器: | UV,262nm、338nm |
進(jìn)樣量: | 1ul |
衍生劑配制方法: | |
OPA配制: | 10mgOPA溶于1ml溶液(0.16ml甲醇+0.14ml硼酸緩沖液+0.7ml純水) |
3-巰基丙酸: | 10ul 3-巰基丙酸用純水稀釋至1ml |
硼酸緩沖液: | 0.1mol/L,用0.4mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至10 |
FMOC: | 10mgFMOC溶于1ml乙腈 |
梯度條件,見表1: |
time(min) | Module | Command | Value |
---|---|---|---|
2.5 | pumps | pump B Conc | 13 |
2.51 | pumps | pump B Conc | 15 |
10 | pumps | pump B Conc | 16 |
15 | pumps | pump B Conc | 35 |
26 | pumps | pump B Conc | 42 |
26.01 | pumps | pump B Conc | 100 |
29.5 | pumps | pump B Conc | 100 |
29.51 | pumps | pump B Conc | 12 |
35 | controller | stop |
圖譜如下:
圖譜1
重現(xiàn)性:
峰號 | RSD%(RT) | RSD%(Area) |
---|---|---|
1 | 0.16 | 1.84 |
2 | 0.05 | 2.18 |
3 | 0.1 | 0.72 |
4 | 0.09 | 0.70 |
5 | 0.08 | 1.09 |
6 | 0.09 | 1.07 |
7 | 0.09 | 0.73 |
8 | 0.1 | 0.85 |
9 | 0.1 | 1.03 |
10 | 0.06 | 0.66 |
11 | 0.04 | 0.87 |
12 | 0.06 | 0.88 |
13 | 0.06 | 0.65 |
14 | 0.07 | 0.97 |
15 | 0.09 | 0.86 |
16 | 0.05 | 0.67 |
17 | 0.09 | 0.77 |
18 | 0.11 | 0.93 |
圖2 保留時間與峰面積重現(xiàn)性圖譜
另外 提供氨基酸檢測分析方案及全套設(shè)備,分析設(shè)備。
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