RT-PCR技術(shù)服務(wù)
- 公司名稱 上海研謹生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/17 9:21:36
- 訪問次數(shù) 8429
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各種實驗代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標準品,對照品,ELISA試劑盒,細胞,血清,等等
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一種從RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構(gòu)建大容量的cDNA文庫方面都是極為靈敏與通用的方法。此外,RT-PCR還易于鑒定已轉(zhuǎn)錄序列是否發(fā)生突變及呈現(xiàn)多態(tài)性,還可用于測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法,可滿足客戶不同的實驗要求。
樣品要求:提供的樣品要新鮮并盡可能多,不推薦提供RNA樣品,或者提供cDNA,并盡可能詳細的提供背景資料(基因序列、Genebank accession number擴增產(chǎn)物的用途等)。
RT-PCR技術(shù)服務(wù)?基本步驟:
● 模板制備:見RNA提取技術(shù)服務(wù)。
● 引物設(shè)計
客戶提供上、下游引物,或者我公司提供免費的引物設(shè)計及合成(包括RT-PCR半定量檢測中的內(nèi)參引物)。
● 反轉(zhuǎn)錄
(1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。
試劑名稱 | 使用量 |
模板RNA | 2μg |
Oligo(dT)12-18 Primer(50μM) | 2.5μl |
(2)70℃保溫5分鐘后迅速在冰上急冷2分鐘以上。
(3)離心數(shù)秒鐘使模板RNA/引物的變性溶液聚集于Microtube管底部。
(4)在上述Microtube管中配制下列反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液。
試劑名稱 | 使用量 |
上述模板RNA/引物變性溶液 | |
5×M-MLV Buffer | 5μl |
dNTP Mixture(各10 mM) | 1.25μl |
RNase Inhibitor(40 U/μl ) | 25U |
M-MLV(200 U/μl ) | 200U |
RNase free dH2O | up to 25μl |
42℃保溫1小時。
(5)70℃保溫15分鐘后冰上冷卻,得到cDNA溶液。
若需要表達,參考基因表達服務(wù)。若需要進行RT-PCR半定量分析,接著以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴增目的基因及看家基因,產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳后進行灰度掃描分析。
RNA模板的制備需另收費(見RNA提取服務(wù))以上為1個目的基因的報價。進行相對定量分析時,同一材料的多個目的基因的價格=1個目的基因價格×目的基因個數(shù)。
提供結(jié)果
完整的實驗操作步驟、電泳圖、定量分析結(jié)果等。
RT-PCR技術(shù)服務(wù)參照: