BY-0979 HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0979
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- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/21 15:10:25
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HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系
HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系是兼具明確親本來源與穩(wěn)定抗體分泌能力的重要模型，由 Balb/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與 NS1/1 骨髓瘤細胞融合構(gòu)建，以抗特定抗原的單克隆抗體分泌特性、貼壁生長優(yōu)勢及雜交瘤技術(shù)的典型應用價值為核心，在免疫檢測標準化、抗原表位分析及診斷試劑開發(fā)中應用廣泛，為單克隆抗體制備提供了精準研究載體。
來源與背景：該細胞系通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)構(gòu)建，親本細胞明確：一方為經(jīng)特定抗原免疫的 Balb/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞（具備抗原特異性抗體分泌能力），另一方為 NS1/1 骨髓瘤細胞（源自 P3X63Ag8 骨髓瘤的亞克隆，缺失次黃piao呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，便于 HAT 培養(yǎng)基篩選）。融合后經(jīng)有限稀釋法克隆篩選，獲得能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細胞株。NS1/1 骨髓瘤細胞的應用使該細胞系在 HAT 選擇培養(yǎng)基中具有生長優(yōu)勢，克隆形成效率比普通骨髓瘤融合細胞系高 30%，自 20 世紀 90 年代建立以來，因親本來源明確、抗體分泌穩(wěn)定，成為雜交瘤技術(shù)教學與抗體研發(fā)的標準細胞模型。
細胞特性：形態(tài)呈現(xiàn)典型雜交瘤特征，貼壁生長時呈上皮樣多邊形，細胞質(zhì)豐富，細胞核大而清晰，核質(zhì)比約 1:2，10% 細胞可見雙核結(jié)構(gòu)（高于普通雜交瘤細胞系），體現(xiàn) Balb/c 小鼠 B 細胞與 NS1/1 骨髓瘤細胞的融合特性。核心特性突出：抗體分泌高效穩(wěn)定，分泌量達 18-25μg/10?細胞 / 24h，連續(xù)傳代 60 次后分泌能力下降不足 10%，顯著優(yōu)于親本 NS1/1 細胞的抗體缺陷表型；抗原結(jié)合特異性強，與靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達 10??-10?1?M，交叉反應率 < 0.8%，經(jīng) ELISA 驗證與 30 種同源抗原無交叉反應；增殖能力優(yōu)異，體外培養(yǎng)倍增時間 45-50 小時，克隆形成率 50%（高于普通 Balb/c 來源雜交瘤），腹腔接種 Balb/c 小鼠后 10-15 天形成腹水，腹水中抗體濃度達 6-12mg/ml（因 NS1/1 背景，腹水產(chǎn)量比常規(guī)細胞系高 20%）。傳代采用 1:4 比例，細胞密度達 80% 時需傳代，過度密集會導致抗體分泌量下降 25%。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點：篩選壓力維持，長期培養(yǎng)需定期使用 HAT 培養(yǎng)基（每 3 代一次），淘汰未融合的 NS1/1 骨髓瘤細胞（發(fā)生率約 5×10??）；血清質(zhì)量敏感，需使用低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.2EU/ml），劣質(zhì)血清會使細胞活力下降 40%，抗體分泌量減少 50%；腹水制備優(yōu)化，小鼠腹腔預先注射降植烷 7 天后接種 1.5×10?細胞，12-18 天收集腹水，每只可獲 8-15ml（因 NS1/1 的腹水形成能力，產(chǎn)量顯著提升）。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時貼壁率達 90%，抗體分泌功能恢復 95% 以上。
檢測鑒定：微生物檢測無細菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細胞質(zhì)量標準。抗體亞型鑒定為 IgG2a 型（輕鏈 κ 型），通過 Western blot 驗證可特異性識別靶抗原（分子量約 55kDa）；染色體核型分析顯示染色體數(shù)目 92-102 條（Balb/c 小鼠 40 條 + NS1/1 細胞 60 條左右的融合特征），含 12 號染色體異常（與抗體分泌相關(guān)）；HAT 培養(yǎng)基存活實驗顯示 100% 細胞可在 HAT 中生長，證實雜交瘤特性。功能驗證中，該抗體用于免疫組化檢測時，靶抗原定位準確率達 98%，無假陽性信號。
應用領域：在免疫檢測標準化中，基于其抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒批內(nèi)變異系數(shù) < 5%，檢測靈敏度達 0.2ng/ml，被納入 3 項國際檢測標準品校準體系；在抗原表位分析中，通過肽掃描技術(shù)結(jié)合該抗體識別特性，成功定位靶抗原上 3 個關(guān)鍵功能性表位，為疫苗設計提供分子基礎；在診斷試劑開發(fā)中，其抗體標記的膠體金試紙條對臨床樣本檢測準確率達 96%，檢測時間縮短至 8 分鐘。此外，作為教學模型，該細胞系常用于演示雜交瘤技術(shù)的篩選原理，HAT 培養(yǎng)基中存活與死亡細胞的對比直觀展現(xiàn)融合細胞的篩選過程。
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