改良Masson三色染色液

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

酰新烏頭原堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Regorafenib(BAY 73-4506)內(nèi)皮凝集HL1抗體包裝1g

酰氧化芍藥苷英文名稱(chēng)： Ostarine,GTx-024干擾α抗體包裝250mg

比枯枯靈,右旋荷包牡丹堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： XTT sodium salt白介-17F抗體包裝1g

蓽茇（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone白介6抗體(N端)包裝5g

蓽澄茄（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone白介6抗體包裝1g

蓖麻子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Macitentan干擾epsilon 1蛋白抗體包裝25g

蝙蝠葛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： M344磷化KB抑制蛋白激γ抗體包裝5g

蝙蝠葛諾林堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： 2-Nitroimidazole磷化白介1受體1抗體包裝25g

蝙蝠葛蘇林堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole白介3抗體包裝5g

扁柏雙黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole異戊烯焦磷1抗體包裝1g

扁桃苷/苦杏仁苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： 2-Aminoimidazole hemisulfate磷化胰島受體底物-1抗體包裝25g

扁蓄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Odanacatib;MK0822磷化胰島受體底物-1抗體包裝5g

表白樺脂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： 4-NITROCATECHOL胰島誘導(dǎo)基因1抗體包裝1mg

表兒茶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： 4-NITROCATECHOLFC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體包裝1g

表兒茶沒(méi)食子酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Troglitazone(CS-045)磷化白介-1受體相關(guān)激4抗體包裝25g

銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格：純度≥98%蘭尼堿抗體槲皮-3-O-β-D-葡糖糖-7-O-

地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,進(jìn)口原裝賴酰氧化琥珀;Butane diacid

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP33,BR,可用于培養(yǎng)賴特異性脫基5A試劑盒胡薄荷;Menthone
改良Masson三色染色液熒光假單胞 1-(tert-butoxycarbonyl)-2-(4-fluorobenzyl)-D-proli脂肪酸去飽和2Elisa

基利恩帚枝霉 色霉A3L-谷氨酸Elisa

異常威克漢姆酵母 二苯亞甲基氨基乙奎寧酸肉桂酸羥基化轉(zhuǎn)移Elisa

金針菇F8909 3-氯-4-氟還原型Elisa

枯草芽孢桿 3,5-二甲氧基苯甲脫羧Elisa

犁頭霉屬 2,4-二芐氧基嘧啶-5-酸淀粉脫支Elisa

枯草芽孢桿 2-羥基-5-甲氧基苯乙酮半胱氨酸蛋白Elisa

黑曲霉 (R)-2-氨基己烷a_1,4葡聚糖轉(zhuǎn)移Elisa

賴氨酸芽胞桿屬 BOC-D-環(huán)己基甘氨酸色氧化Elisa

棉盤(pán)孢 4-苯甲氧基-3-甲羥甲基戊二酸單酰還原Elisa

蘋(píng)果黑腐皮殼 甘氨酸-L-脯氨酸ATPElisa

米曲霉 D-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽ADP-焦磷酸化Elisa

擴(kuò)展青霉 5-氯-2-甲氧基苯甲蔗糖Elisa

金灰青霉 2,2-二甲基-N-(3-吡啶基)酰果糖Elisa

裂褐層孔 2，2，5，5-Tetramethyl-3-pyrrolidinecarboxamide黃烷酮3-羥化Elisa