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稀釋法藥敏試驗可用于定量測試抗菌藥物對某一細(xì)菌的體外活性,分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時,抗菌藥物的濃度通常經(jīng)過倍比(lg2)稀釋,能抑制待測菌肉眼可見生長的濃度為小抑菌濃度(MIC),一個特定抗菌藥物的測定濃度范圍應(yīng)該包含能夠檢測細(xì)菌的解釋性折點(敏感、中介和耐藥)的濃度。

由于各種菌對藥物的敏感性不同,產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同,如果菌種不純,試驗中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異,影響判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此需要對各種致病菌提純后,分別進(jìn)行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時,需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標(biāo)準(zhǔn)是要求菌液濃度在1.5億/ml 左右。若菌液濃度過高,該菌會對所有藥物產(chǎn)生耐藥;反之,菌液濃度過低,該菌會對所有藥物均敏感。確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養(yǎng)物菌懸液的吸光度,來確定菌液濃度。其微生物實驗室大多數(shù)用此法來確定藥敏試驗的菌液濃度

藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上,使細(xì)菌均勻分布,這樣才能使試驗結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后,細(xì)菌要有一段時間的適應(yīng)過程,但是時間不能過長,否則會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時,每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口,避免藥敏紙片之間相互混淆,以提高藥敏的準(zhǔn)確性。藥物殺滅細(xì)菌存在一定的量比,藥敏試驗培養(yǎng)基上細(xì)菌層越厚抑菌圈就越小,反之抑菌圈就越大。根據(jù)一種藥物抑菌圈的有無或者大小,只能判斷出該藥對細(xì)菌有沒有效果,但其敏感性的高低需要通過科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒瀬泶_定。藥物的敏感程度需要根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果,并結(jié)合以上因素做綜合分析,才能得出科學(xué)的結(jié)論,而片面地根據(jù)藥敏圈的大小來決定敏感與否,結(jié)果不夠準(zhǔn)確。

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