Agarose PureCube Rho1D4
- 公司名稱 成都正民德思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) Agarose
- 產(chǎn)地 德國(guó)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2022/12/14 19:19:02
- 訪問(wèn)次數(shù) 420
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| 供貨周期 | 一個(gè)月 |
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產(chǎn)品詳情：
對(duì)膜蛋白提取有高特異性和高產(chǎn)量
每個(gè)批次的PureCube凝膠均是按照嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系生產(chǎn)并嚴(yán)格檢驗(yàn)，以確保每一批分裝的產(chǎn)品都有高的蛋白結(jié)合能力。通過(guò)與特異性抗原表位相互作用，輔以優(yōu)化過(guò)的純化操作步驟，能使目標(biāo)蛋白在洗脫組分中有高產(chǎn)出量。圖1是對(duì)CXC趨化因子受體4(CXCR4)的純化溶于Fos-Choline®-14的帶標(biāo)簽蛋白通過(guò)大腸桿菌表達(dá)，再經(jīng)由含PureCube Rho1D4瓊脂糖的層析柱純化。用Rho1D4多肽作為洗脫液，4次洗脫組分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目標(biāo)蛋白。蛋白印跡結(jié)果說(shuō)明CXCR4大約是65 kDa和35 kDa。這些條帶是39.7 kDa膜蛋白的二聚體和單體。單體、二聚體的分離以及去除洗脫肽段，可以通過(guò)排阻層析的方法實(shí)現(xiàn)。
圖1：用PureCube Rho1D4瓊脂糖純化CXCR4。
大腸桿菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline®-14中，溶解的組分（SF）與裝有Rho1D4抗體的免疫親和層析柱相結(jié)合。平衡組分中沒(méi)有測(cè)得損失目標(biāo)蛋白，經(jīng)分光光度計(jì)測(cè)定，CXCR4在洗脫組分（E1-E4）中得濃度范圍在0.6-1.0mg/mL。
蛋白 | 表達(dá)系統(tǒng) | 純度 | 產(chǎn)率（所有回收蛋白） | 采取的純化步驟 |
hVN1R1 G蛋白偶聯(lián)受體 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | 90% | 1mg/1g細(xì)胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
FPR3 G蛋白偶聯(lián)受體 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | 90% | 2mg/6g細(xì)胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
TAAR5 G蛋白偶聯(lián)受體 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | 90% | 1mg/9g細(xì)胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
OR131-2 G蛋白偶聯(lián)受體 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | 90% | 2.9mg/10g細(xì)胞 | Rho1D4 IAC +centrifugation |
hOR17-4 G蛋白偶聯(lián)受體 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | 90% | 7.5mg/2.5L培養(yǎng)物 | Rho1D4 IAC+SEC |
hOR17-4 G蛋白偶聯(lián)受體 | 無(wú)細(xì)胞小麥胚芽提取物 | 70%* | 0.3mg/mL 反應(yīng)溶液* | Rho1D4 IAC+SEC |
CD81 四次跨膜蛋白 | 可誘導(dǎo)的HEK293S細(xì)胞系（哺乳動(dòng)物） | ＞95% | 26μg/3×10^7 個(gè)細(xì)胞 | Rho1D4 IAC |
AE1 溶質(zhì)載體 | S.啤酒系BJ5457 | 93% | 2.5mg/18L 培養(yǎng)物 | Rho1D4 IAC |
表1：有文獻(xiàn)報(bào)道的使用Rho1D4系統(tǒng)純化膜蛋白的純度和產(chǎn)率。盡管很多用Rho1D4系統(tǒng)純化的膜蛋白均為G蛋白偶聯(lián)受體家族，該系統(tǒng)也可以有助于辨別其他如轉(zhuǎn)運(yùn)體之類的膜蛋白。 IAC：免疫親和層析；SEC：排阻層析。
在20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)Rho1D4表位和配對(duì)抗體，當(dāng)時(shí)通過(guò)將抗體偶聯(lián)到Sepharose®上來(lái)純化在猴腎細(xì)胞中表達(dá)的牛視紫紅質(zhì)。自此，Rho1D4系統(tǒng)（標(biāo)簽，偶聯(lián)抗體的親和基質(zhì)，洗脫肽）開(kāi)始用于少量膜蛋白的純化，包括G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR），ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)體，溶質(zhì)反向轉(zhuǎn)運(yùn)體和一個(gè)四次跨膜蛋白。
圖2：假設(shè)有3個(gè)跨膜域的膜蛋白。Rho1D4標(biāo)簽加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A
通過(guò)轉(zhuǎn)基因修飾在目標(biāo)膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4標(biāo)簽（如圖1）。一旦配有該序列，即可用裝載有Rho1D4抗體的親和基質(zhì)捕獲目標(biāo)蛋白，并隨后通過(guò)添加過(guò)量Rho1D4多肽，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合基質(zhì)表面抗體來(lái)洗脫目標(biāo)蛋白，用此方法洗脫比改變pH值等方式更加溫和。
Rho1D4系統(tǒng)的一大優(yōu)勢(shì)是抗體與表位相互作用特異性非常高。而其另一大優(yōu)勢(shì)是洗脫目的蛋白收率相當(dāng)高。利用Rho1D4純化的目標(biāo)蛋白可用于功能性研究，如：配體結(jié)合的特性，蛋白與蛋白間的相互作用。
*純度是從低濃度經(jīng)一步Rho1D4 IAC在反應(yīng)溶液中得出的；產(chǎn)率是在洗脫成分濃縮并過(guò)SEC柱后計(jì)算。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
（1）德國(guó)制造，歐美膜蛋白純化產(chǎn)品供應(yīng)商；
（2）膜蛋白純化的理想解決方案，可以獲得純凈且活性的膜蛋白；
（3）結(jié)合能力可高達(dá)3-4mg/mL；
（4）高度特異性純化帶有標(biāo)簽的重組膜蛋白；
（5）可重復(fù)再生使用；
（6）好的流量分布和小空隙體積；
（7）兼容常用的色譜儀器；
（8）配合Nanodisc使用，是目前非常有效的膜蛋白提取解決方案，數(shù)家科研院校正在使用
產(chǎn)品參數(shù)：
用途 | Rho1D4 (TETSQVAPA)標(biāo)記蛋白的高特異性親和純化 |
特異性 | 與Rho1D4標(biāo)記蛋白的親和性 |
特殊功能 | 強(qiáng)烈推薦用于膜蛋白的純化 |
結(jié)合力 | 3-4 mg / ml 瓊脂糖 |
磁珠配體 | Rho1D4 抗體 |
粒徑大小 | 40 μm |
螯合劑穩(wěn)定性 | 在含有10 mM DTT 和1 mM EDTA的緩沖液中穩(wěn)定 |
罐裝量 | 以50?%懸浮液進(jìn)行運(yùn)送 |
所需設(shè)備 |
· 裂解液 · 洗滌緩沖液 · 洗脫緩沖液 · 冰水浴 · 可用50?mL離心管的可預(yù)冷離心機(jī) (最小轉(zhuǎn)速 10,000 x g) · 50?mL 離心管 · 微量移液槍和微量移液槍尖 · 一次性重力柱，帶蓋底出口，2ml · pH計(jì) · 回轉(zhuǎn)搖床 · SDS-PAGE緩沖液，試劑和設(shè)備 可選擇：Western Blot試劑和設(shè)備 |
推薦流速和保存溫度 | 0.25-1.0mL/min，4℃ |
訂購(gòu)詳情：
貨號(hào) | 產(chǎn)品 | 粒徑 （μm） | 結(jié)合 載量 | 運(yùn)輸 溫度 | 儲(chǔ)存 溫度 | 應(yīng)用 |
33101 | PureCube Rho1D4 Agarose(1ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | 超高特異性用于純化帶Rho1D4 標(biāo)簽的膜蛋白，最大流速為 6 mL/min，穩(wěn)定于低濃度去污劑環(huán)境
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33102 | PureCube Rho1D4 Agarose(5ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33103 | PureCube Rho1D4 Agarose(10ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33105 | PureCube Rho1D4 Agarose(50ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33199 | Rho Starter Set 1:PureCube Rho1D4 | 3-4mg/mL | 冰袋 |
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