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Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

成都邁睿可生物科技有限公司出品

Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)使用說(shuō)明

【產(chǎn)品基本信息】

產(chǎn)品名稱(chēng)：Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒) 產(chǎn)品貨號(hào)：MRC-C23009-500T

【包裝清單】

【產(chǎn)品描述】

Cell Counting Kit-8，簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8開(kāi)發(fā)的應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑盒。

WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

WST-8被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan為水溶性，無(wú)需額外增加溶解步驟，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。同時(shí)，培養(yǎng)基中的酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。

圖1. WST-8檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)

【產(chǎn)品使用說(shuō)明】

1.通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予藥物刺激。

推薦操作：通常建議培養(yǎng)板邊孔不用于實(shí)驗(yàn)，僅加入100μL的培養(yǎng)基以減少培養(yǎng)過(guò)程中蒸發(fā)的影響

2.每孔加入10微升增強(qiáng)型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升增強(qiáng)型CCK-8溶液，其它情況以此類(lèi)推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。

推薦操作：檢測(cè)前，用新鮮的培養(yǎng)基或不含血清的培養(yǎng)將CCK-8按1:10（CCK-8試劑：培養(yǎng)基）稀釋?zhuān)靹蚺涑蒀CK-8工作液。然后吸去培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)上清，加入稀釋好的CCK-8工作液，100μL/孔。此操作可減少重復(fù)樣本間的誤差。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4.在450nm測(cè)定吸光度?？梢允褂么笥?00nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

【保存條件】

4oC避光保存一年有效，-20oC避光保存兩年有效。

【注意事項(xiàng)】

1.本試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。

2.用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

3.為了避免CCK-8溶液可能帶來(lái)的對(duì)于后續(xù)檢測(cè)的影響，除非該細(xì)胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過(guò)的細(xì)胞用于其它實(shí)驗(yàn)。

4.如果吸光度值太低，可適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或延長(zhǎng)加入CCK-8溶液后的孵育時(shí)間。

5.部分金屬對(duì)CCK-8的顯色有影響，如：氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅均會(huì)降低CCK-8試劑的靈敏度。

6.CCK-8孵育結(jié)束后如果不能及時(shí)檢測(cè)，可將培養(yǎng)板放入4℃冰箱，或加入10μL 0.1M Hcl或加入10μL 1% SDS溶液終止反應(yīng)。

7.試劑使用過(guò)程中要避免帶入細(xì)菌污染。

8本產(chǎn)品僅用于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

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