AIWB-012 親和生命Co-IP/WB 組織/細胞通用裂解液

產品特點

性能溫和 —— 在非變性條件下裂解細胞，不破壞蛋白間相互作用

強效保護 —— 多種蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑維持蛋白原有狀態(tài)

普適性強 —— 適用于動物、植物、真菌及細菌的細胞或組織樣品

兼容性強 —— 兼容多種實驗室WB，IP及Co-IP等

適用于動物、植物、真菌及細菌的細胞或組織樣品。提取的蛋白樣品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等實驗。

06 使用方法

06-1 提取細胞蛋白 a. 貼壁細胞： 1. 去除培養(yǎng)液后，用1×PBS輕柔漂洗一遍； 2. 按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液，然后用移液槍吹打數下，使裂解液 和細胞充分接觸； 規(guī)格 適用于動物、植物、真菌及細菌的細胞或組織樣品。提取的蛋白樣品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等實驗。3. 冰浴或4℃ 靜置15 min，使細胞充分裂解。 b. 懸浮細胞： 1. 低速離心收集細胞，用1×PBS重懸并清洗一遍； 2. 再次低速離心收集細胞，去除上清，收集沉淀，通過渦旋或者手指輕彈管底，分散細胞； 3. 按100萬細胞加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液； 4. 用移液槍吹打數下使裂解液和細胞充分接觸，冰浴或4℃靜置15 min，直至無明顯的細胞沉淀 5. 若樣品粘稠，可用注射器反復吹打，降低樣品粘稠度后進行下一步實驗。 c. 細菌或酵母： 1. 取1 mL菌液或酵母液低速離心，去除上清，用1×PBS重懸并清洗一遍； 2. 再次離心，去除上清，然后通過渦旋或者手指輕彈管底，分散底部的細菌或酵母； 3. 加入100-200 μL裂解液，輕輕渦旋以混勻，冰浴或4℃靜置15 min。 注：細菌和酵母可以分別使用溶jun酶和破壁酶(Lyticase)消化，再加入裂解液，裂解效果更佳。 d. 收集蛋白樣品： 1. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5 min，取上清； 2. 進行后續(xù)的PAGE、WB、IP和Co-IP等實驗

06-2 提取組織蛋白 a. 將新鮮組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，洗凈組織血跡，用濾紙吸干組織表面液 體，然后將組織切成細小的碎片； b.準備多個EP管，稱重并做好標記，將組織小塊放入EP管中，稱重，按照每20mg組織加入 100-200μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不到位，可適當增加裂解液使用量，如果需要較 高濃度的蛋白樣品，可適當減少裂解液使用量； c. 用玻璃勻漿器或組織研磨器冰浴勻漿1-2 min，直至充分裂解； d. 10000-14000g離心3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)PAGE、WB、IP和Co-IP等實驗。