卵裂球及囊胚單細(xì)胞制備試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品用于以哺乳動(dòng)物卵裂球（blastomere，含 2-8 個(gè)細(xì)胞）和囊胚制備為起始材料制備單個(gè)細(xì)胞。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，不用單獨(dú)優(yōu)化條件。

2.所得到的單個(gè)細(xì)胞，可以用于后續(xù)分子生物學(xué)研究，包括全基因組擴(kuò)增、PCR 擴(kuò)增、RT-PCR、全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增或蛋白質(zhì)研究。但不推薦用于細(xì)胞學(xué)研究， 不推薦用于細(xì)胞培養(yǎng)。

3.起始材料既可是哺乳動(dòng)物卵裂球，也可以是哺乳動(dòng)物囊胚。

4.本試劑盒足夠 200 次制備，每次制備可以處理一個(gè)卵裂球或囊胚。

5.卵裂球及囊胚單細(xì)胞制備試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

卵裂球及囊胚洗滌液2 mL×22 mL 本色管

透明帶剝離液2 mL2 mL 白蓋管

卵裂球及囊胚細(xì)胞解離液 A2 mL2 mL 紅蓋管

卵裂球及囊胚細(xì)胞解離液 B2 mL2 mL 黃蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

待處理樣品，顯微操作系統(tǒng)、塑料培養(yǎng)皿。

使用方法：

一、洗滌卵裂球或囊胚

1.在干凈塑料培養(yǎng)皿中點(diǎn)加 2 個(gè) 5 ?L 的卵裂球及囊胚洗滌液（以下簡(jiǎn)稱洗滌液）小液滴。

2.在顯微鏡下用微量注射器轉(zhuǎn)移一個(gè)卵裂球或囊胚到第一滴洗滌液中。此步將稀釋掉卵裂球或囊胚帶入的培養(yǎng)基等雜質(zhì)，相當(dāng)于進(jìn)行了第 1 次洗滌。

3.然后再將卵裂球或囊胚轉(zhuǎn)移到第二滴洗滌液中，相當(dāng)于進(jìn)行了第 2 次洗滌。。二、剝離透明質(zhì)（囊胚沒(méi)有透明帶，如果樣本為囊胚，可以跳過(guò)此步）

4.在干凈培養(yǎng)皿中點(diǎn)加 2 個(gè)含 5 ?L 透明帶剝離液的小液滴和 2 個(gè)含 5 ?L 洗滌

液的小液滴。

5.將卵裂球轉(zhuǎn)移到第一個(gè)透明帶剝離液小液滴中，相當(dāng)于洗滌一次。

6.馬上再將卵裂球轉(zhuǎn)移到第二個(gè)透明帶剝離液小液滴中。

7.在倒置顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察透明帶剝離情況。一般 3-5 分鐘后透明帶將與細(xì)胞剝離。

8.將脫去透明帶的卵裂球轉(zhuǎn)到第一滴洗滌液中，此步將洗去透明帶剝離液。

9.馬上再將卵裂球轉(zhuǎn)移到第二滴洗滌液中，此步將進(jìn)一步洗去透明帶剝離液。。三、解離單細(xì)胞

10.在一個(gè)干凈的塑料離心管中將卵裂球及囊胚細(xì)胞解離液A和卵裂球及囊胚細(xì)

胞解離液 B 按 1：1 的體積比例新鮮混合得到單細(xì)胞解離液。每次用多少配多少。解離一個(gè)卵裂球或囊胚需要 20 ?L 單細(xì)胞解離液。

11.在干凈培養(yǎng)皿中點(diǎn)加 2 個(gè)各含 10 ?L 單細(xì)胞解離液的小液滴。

12.將 1 個(gè)卵裂球或囊胚轉(zhuǎn)移到第一個(gè)單細(xì)胞解離液小液滴中。

13.馬上再將卵裂球或囊胚轉(zhuǎn)移到第二個(gè)單細(xì)胞解離液小液滴中。

14.不時(shí)在倒置顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察單細(xì)胞解離情況，可以不時(shí)用顯微注射針輕柔吹打以加速細(xì)胞解離。對(duì)只有兩個(gè)細(xì)胞的卵裂球，解離過(guò)程一般需要 5 分鐘， 對(duì)于囊胚，解離一般需要 3-5 小時(shí)。

15.細(xì)胞解離后，在顯微鏡下用顯微注射儀將單個(gè)細(xì)胞分別轉(zhuǎn)移到不同的 200 ?L

的 PCR 管中待用。注意取不含細(xì)胞的溶液做后續(xù)實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照留存。

16.所得單細(xì)胞可以直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，包括單細(xì)胞裂解，單細(xì)胞全基因擴(kuò)增、單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增等。

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