Far-Western Blot分析

Far-Western Blot分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Far-Western Blot是一種基于Western Blot技術(shù)的分子生物學(xué)方法，可用于檢測(cè)體外dànbáizhì與dànbáizhì的相互作用，尤其是不需要目標(biāo)dànbáizhì的天然結(jié)構(gòu)的相互作用檢測(cè)。

Far-Western Blot技術(shù)的整體工作流程與Western Blot相似，只是Western Blot中探測(cè)目標(biāo)dànbáizhì需要抗體，而Far-Western Blot分析中不需要抗體，而是使用經(jīng)過(guò)純化和標(biāo)記的“誘餌”蛋白來(lái)探測(cè)和檢測(cè)膜上的目標(biāo)蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中，dànbáizhì都是通過(guò)SDS凝膠和native PAGE凝膠對(duì)樣品進(jìn)行分離，然后將dànbáizhì從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上。轉(zhuǎn)模后，用BSA進(jìn)行封閉。在膜上對(duì)dànbáizhì進(jìn)行變性和復(fù)性，及后續(xù)的檢測(cè)步驟。Far-Western Blot技術(shù)用商業(yè)化的高度純化的誘餌蛋白將膜標(biāo)記上探針。在誘餌蛋白與目標(biāo)蛋白反應(yīng)后，根據(jù)所使用的誘餌蛋白，可以檢測(cè)到與該目標(biāo)蛋白相對(duì)應(yīng)的條帶。

為了鑒定與給定蛋白相互作用的蛋白，F(xiàn)ar-Western Blot是一個(gè)實(shí)驗(yàn)成本低、靈敏度高的有效平臺(tái)。遠(yuǎn)western blotting的原理是對(duì)western blotting的改進(jìn)，以自然折疊的重組蛋白作為dìyī個(gè)探針，與轉(zhuǎn)染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二個(gè)探針是針對(duì)給定蛋白的特異性抗體，而酶標(biāo)的第三個(gè)探針是針對(duì)第二個(gè)探針的抗體。當(dāng)與LC-MS-MS蛋白鑒定相結(jié)合時(shí)，可以對(duì)得到的蛋白斑點(diǎn)(或蛋白條帶)進(jìn)行表征，然后進(jìn)行進(jìn)一步的功能分析，如蛋白免疫沉淀等。

Far-Western Blot分析時(shí)，當(dāng)需要保留dànbáizhì的天然構(gòu)象和天然相互作用時(shí)需要注意以下問(wèn)題：1）變性條件下在SDS凝膠中分離的dànbáizhì可能會(huì)發(fā)生變性，而變性蛋白可能不會(huì)與誘餌蛋白發(fā)生反應(yīng)，從而導(dǎo)致無(wú)法識(shí)別出相互作用。2）在結(jié)合之前將dànbáizhì變性并復(fù)性，也可能導(dǎo)致dànbáizhì發(fā)生構(gòu)象變化，從而影響靶蛋白與誘餌蛋白的結(jié)合。3）如果結(jié)合位點(diǎn)受其它因素影響，失去與誘餌蛋白的結(jié)合能力，使誘餌蛋白無(wú)法與之反應(yīng)，也可能導(dǎo)致相互作用檢測(cè)失敗。更棘手的是，以非天然構(gòu)象呈現(xiàn)的dànbáizhì可能以新的非天然方式發(fā)生相互作用，導(dǎo)致檢測(cè)假陽(yáng)性。

百泰派克生物科技提供Far-Western Blot分析服務(wù)，可以根據(jù)您的需求定制實(shí)驗(yàn)，并對(duì)可能影響結(jié)果的潛在因素進(jìn)行評(píng)估。我們承諾給出的數(shù)據(jù)可靠，且可重復(fù)性高。

Far-Western Blot分析的優(yōu)勢(shì)

• 可用于體外dànbáizhì相互作用研究 • 分析蛋白的結(jié)合域 • 比較dànbáizhì結(jié)合的親和力 • 無(wú)需特異性抗體

Far-Western Blot分析的工作流程

• 定量dànbáizhì，并通過(guò)SDS或native PAGE分離 2. 將dànbáizhì從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上 3. 將dànbáizhì進(jìn)行變性和復(fù)性，以保證膜上的dànbáizhì結(jié)合位點(diǎn)充分暴露 4. BSA緩沖液對(duì)膜進(jìn)行封閉 5. 將膜與純化的誘餌蛋白進(jìn)行孵育 6. 檢測(cè)誘餌蛋白信號(hào) 7. 圖像分析及報(bào)告交付

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線(xiàn)性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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