ChIP染色質(zhì)免疫共沉淀

一、技術(shù)簡(jiǎn)介

ChIP（染色質(zhì)免疫共沉淀）是一種研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的關(guān)鍵技術(shù)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)鑒定、表觀遺傳修飾分析等領(lǐng)域。

二、技術(shù)原理

利用抗原抗體的特異性結(jié)合，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來，能夠真實(shí)地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

1.轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究：鑒定轉(zhuǎn)錄因子（如p53、NF-κB）的DNA結(jié)合位點(diǎn)。

2.表觀遺傳學(xué)：分析組蛋白修飾（如H3K27me3）在基因沉默中的作用。

3.疾病機(jī)制：探索癌癥中異常蛋白（如MYC）的基因組結(jié)合模式。

4.可與qpcr、seq等技術(shù)聯(lián)用。

四、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

ChIP通過甲醛交聯(lián)捕獲細(xì)胞內(nèi)真實(shí)狀態(tài)下蛋白質(zhì)與DNA的動(dòng)態(tài)結(jié)合，避免體外實(shí)驗(yàn)的假陰性或假陽(yáng)性，尤其適合研究轉(zhuǎn)錄因子等短暫結(jié)合事件。而特異性抗體可又精準(zhǔn)富集目標(biāo)蛋白結(jié)合的DNA片段，結(jié)合qPCR或測(cè)序（ChIP-seq）實(shí)現(xiàn)低至千細(xì)胞級(jí)別的檢測(cè)（如優(yōu)化試劑盒），靈敏度顯著，且具有廣泛適用性。

五、樣本類型

新鮮細(xì)胞（貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞）、凍存細(xì)胞、凍存組織、交聯(lián)后細(xì)胞樣本。

六、樣本需求

細(xì)胞樣本：約1×10^7個(gè)（可以是1個(gè)10cm皿，或以懸浮細(xì)胞形式存儲(chǔ)于離心管中，或1個(gè)T75瓶）；

凍存組織：約70mg；

交聯(lián)細(xì)胞樣本：使用1%甲醛交聯(lián)處理細(xì)胞。

七、樣本準(zhǔn)備&運(yùn)輸

活細(xì)胞樣本：距離較近的可以將養(yǎng)在皿/T75瓶/離心管內(nèi)的新鮮細(xì)胞樣本常溫快遞（最遲次日達(dá)）運(yùn)輸，本市內(nèi)可閃送或親自遞送，距離較遠(yuǎn)的，可-80℃凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸；

組織樣本&交聯(lián)后細(xì)胞樣本：-80℃凍存干冰運(yùn)輸。

八、需提供的試劑

檢測(cè)用ChIP級(jí)抗體。

九、實(shí)驗(yàn)周期

1-2周（不包含測(cè)序）

十、其他

后續(xù)檢測(cè)選擇RT PCR時(shí)，需提供后續(xù)檢測(cè)的位點(diǎn)。

甲醛交聯(lián)細(xì)胞具體步驟：①在細(xì)胞皿中加入終濃度為1%的甲醛，37℃孵育10分鐘；②使用含[1mM PMSF，1μg/ml抑肽酶和1μg/ml pepstatin A]的冰冷DPBS洗滌細(xì)胞兩次。③將細(xì)胞刮入含有蛋白酶抑制劑的2ml冰冷的DPBS中，并轉(zhuǎn)移到離心管中，凍存寄送。