iTRAQ與TMT技術(shù)比較：選擇適合的蛋

iTRAQ與TMT技術(shù)比較：選擇適合的蛋白質(zhì)定量方法檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì組學(xué)定量技術(shù)的發(fā)展極大推動(dòng)了生命科學(xué)研究的進(jìn)步，尤其是在疾病機(jī)制探索、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)和藥物開發(fā)領(lǐng)域。作為兩種主流的標(biāo)記型定量方法，iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）和TMT（Tandem Mass Tags）長期以來被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜樣本的定量分析。兩者在原理、性能和應(yīng)用場景上各有特點(diǎn)，如何選擇合適的方法，成為科研人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)初期的重要決策之一。

一、iTRAQ與TMT的基本原理

iTRAQ和TMT技術(shù)均采用同位素標(biāo)記策略，通過在肽段上引入等重標(biāo)簽，使不同樣本在一級(jí)質(zhì)譜（MS1）中表現(xiàn)為相同質(zhì)量，但在二級(jí)質(zhì)譜（MS2）中釋放特定的報(bào)告離子，實(shí)現(xiàn)多樣本的相對(duì)定量。二者都極大提高了多樣本同時(shí)分析的效率，且能夠兼容復(fù)雜生物樣本，如組織、細(xì)胞和體液。iTRAQ試劑zuì初提供4-plex（四重標(biāo)記）版本，后擴(kuò)展至8-plex；TMT則從6-plex起步，逐步發(fā)展到11-plex、16-plex甚至18-plex，極大提升了樣本通量。隨著質(zhì)譜儀性能的提升，特別是高分辨率Orbitrap質(zhì)譜的發(fā)展，TMT的高通量優(yōu)勢逐漸得到更多發(fā)揮。

二、靈敏度與定量準(zhǔn)確性

在靈敏度和定量準(zhǔn)確性方面，iTRAQ和TMT表現(xiàn)接近，但也存在細(xì)微差異。iTRAQ因較早推廣，在早期的質(zhì)譜平臺(tái)上積累了豐富的數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)，尤其適用于蛋白表達(dá)量變化較大的樣本。而TMT隨著質(zhì)譜分辨率的提升，表現(xiàn)出在低豐度蛋白檢測方面的潛力，特別是在多重標(biāo)記體系（如TMTpro 16plex）中，能更好地兼顧深度和定量線性。iTRAQ和TMT均存在“比率壓縮”（ratio compression）現(xiàn)象，即共碎片干擾導(dǎo)致定量精度下降。這一問題在高復(fù)雜度樣本中尤為明顯，但通過結(jié)合高分辨率MS2或MS3策略、優(yōu)化樣品預(yù)處理流程，可以有效緩解。

三、多重標(biāo)記能力與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)靈活性

樣本通量是選擇定量方法時(shí)的重要考量因素。TMT憑借其更高的多重標(biāo)記能力，為大規(guī)模比較實(shí)驗(yàn)提供了更大靈活性。例如，TMT 16plex允許一次性對(duì)16個(gè)樣本進(jìn)行并行分析，極大節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和儀器資源，適合臨床大隊(duì)列、時(shí)間序列研究等高樣本量項(xiàng)目。iTRAQ雖然在多重標(biāo)記數(shù)量上稍顯遜色，但對(duì)于中小規(guī)模研究仍然足夠。特別是在對(duì)比組數(shù)較少、對(duì)數(shù)據(jù)一致性要求較高的實(shí)驗(yàn)中，iTRAQ依然是一種穩(wěn)健的選擇。

四、數(shù)據(jù)質(zhì)量與分析兼容性

兩種技術(shù)都要求較高水平的前端樣品制備標(biāo)準(zhǔn)化，包括蛋白提取、酶解、標(biāo)記反應(yīng)和分離純化過程。質(zhì)控環(huán)節(jié)對(duì)于確保數(shù)據(jù)質(zhì)量至關(guān)重要。在數(shù)據(jù)分析層面，主流質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理軟件（如Proteome Discoverer、MaxQuant、SpectroMine等）均支持iTRAQ和TMT數(shù)據(jù)處理。TMT近年來在算法優(yōu)化和數(shù)據(jù)庫匹配方面有較多更新，尤其是對(duì)MS3數(shù)據(jù)的專門支持，進(jìn)一步提升了定量準(zhǔn)確性。此外，TMT因具有更細(xì)致的標(biāo)簽設(shè)計(jì)（例如在TMTpro系列中采用更優(yōu)化的報(bào)告離子排布），在復(fù)雜樣本分辨率上表現(xiàn)更優(yōu)，有助于提高蛋白鑒定深度。

五、成本與實(shí)驗(yàn)可及性

成本因素在實(shí)驗(yàn)方案選擇中不可忽視。iTRAQ和TMT的試劑價(jià)格相近，均高于無標(biāo)記（Label-free）定量方法。但考慮到樣本通量、數(shù)據(jù)質(zhì)量和結(jié)果一致性，標(biāo)記型定量在許多應(yīng)用場景下仍然具有較高性價(jià)比。實(shí)際應(yīng)用中，iTRAQ因其試劑盒在市場上存在時(shí)間較長，某些情況下可能更易于采購和管理。而TMT，尤其是高通量版本，如TMTpro 16plex和18plex，雖然單次實(shí)驗(yàn)成本更高，但在單位樣本成本攤銷后，整體投入可能更具優(yōu)勢，尤其適合大規(guī)模項(xiàng)目。

六、應(yīng)用場景比較

根據(jù)項(xiàng)目需求的不同，iTRAQ和TMT各有適配優(yōu)勢：

• 生物標(biāo)志物篩選與驗(yàn)證：TMT因高通量特性，適合處理大規(guī)模臨床樣本

• 基礎(chǔ)機(jī)制研究：iTRAQ和TMT均可勝任，依據(jù)樣本量和實(shí)驗(yàn)預(yù)算靈活選擇

• 時(shí)間序列研究：TMT在多時(shí)間點(diǎn)、多條件實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中優(yōu)勢明顯

• 細(xì)胞或小動(dòng)物模型研究：iTRAQ在控制批次效應(yīng)和提高數(shù)據(jù)一致性方面具有良好表現(xiàn)

iTRAQ與TMT技術(shù)各有千秋，選擇何種dànbáizhì定量方法，應(yīng)基于實(shí)驗(yàn)規(guī)模、預(yù)算、樣本特性以及研究目標(biāo)綜合考量。作為生命科學(xué)領(lǐng)域可信賴的合作伙伴，百泰派克生物科技始終致力于為客戶提供zhuānyè、高質(zhì)量的定量蛋白組分析服務(wù)，助力科學(xué)探索與產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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