全面了解抗體測序：從肽段識別到全長序列拼

全面了解抗體測序：從肽段識別到全長序列拼接檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

抗體測序（Antibody Sequencing）是獲取抗體氨基酸序列的關(guān)鍵技術(shù)，廣泛應(yīng)用于抗體藥物開發(fā)、功能改造、結(jié)構(gòu)建模及zhuānlì保護等領(lǐng)域。該技術(shù)以高分辨率質(zhì)譜為核心，通過蛋白酶解和數(shù)據(jù)拼接重建出抗體輕鏈（LC）和重鏈（HC）的完整序列。本文將系統(tǒng)梳理抗體測序的核心流程、關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)及應(yīng)用價值，幫助科研人員理解其科學原理與實際意義。

一、抗體測序的基本原理

抗體測序是通過dànbáizhì質(zhì)譜（proteomics）技術(shù)，在無RNA模板的情況下，從蛋白層面直接解析抗體的氨基酸序列。相比核酸測序，它不受細胞狀態(tài)限制，特別適用于無細胞株樣品或RNA質(zhì)量受限的抗體來源。

其基本流程包括：

• 蛋白酶解生成肽段；

• LC-MS/MS獲取質(zhì)譜圖；

• 應(yīng)用de novo算法重建肽段序列；

• 拼接輕鏈與重鏈全長序列；

• 對關(guān)鍵功能區(qū)域（如CDR）進行注釋與驗證。

二、核心技術(shù)流程與優(yōu)化策略

1、多酶協(xié)同酶解

• 目的：增加肽段冗余度，覆蓋變異區(qū)域

• 常用蛋白酶：Trypsin、Lys-C、Chymotrypsin、Asp-N等

• 優(yōu)勢：實現(xiàn)高覆蓋率、減少盲區(qū)，尤其適用于CDR區(qū)域

2、高分辨率質(zhì)譜采集

• 平臺：LC-MS/MS系統(tǒng)，支持HCD、ETD等碎裂方式

• 關(guān)鍵指標：質(zhì)量準確度（<1 ppm）、分辨率、動態(tài)范圍

• 效果：可解析低豐度肽段及翻譯后修飾，確保序列準確性

3、De novo反演與數(shù)據(jù)庫比對結(jié)合

• De novo測序：適用于未知抗體序列，通過碎片離子圖譜重建肽段

• 數(shù)據(jù)庫匹配：提高框架區(qū)識別置信度

• 結(jié)合優(yōu)勢：保障新序列識別能力，同時控制錯誤識別率

4、全長序列拼接與結(jié)構(gòu)建構(gòu)

• 拼接依據(jù)：肽段重疊、酶切位點邏輯、一致性檢查

• 輔助建構(gòu)：參考IgG結(jié)構(gòu)模板識別框架區(qū)與CDR區(qū)界限

• 交叉驗證：必要時結(jié)合轉(zhuǎn)錄組或外部表達數(shù)據(jù)提高可靠性

三、質(zhì)量控制標準

為了確保抗體測序結(jié)果具備科研和工程應(yīng)用價值，應(yīng)關(guān)注以下質(zhì)量指標：

• 序列覆蓋率：全鏈應(yīng) >95%，CDR區(qū)全覆蓋

• 拼接一致性：多酶數(shù)據(jù)交叉驗證，消除歧義肽段

• CDR識別精度：jīngquè定位CDR1~CDR3，支持結(jié)構(gòu)建模

• 完整性報告：包括酶解圖譜、拼接圖示、原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)及FASTA格式輸出

四、抗體測序的典型應(yīng)用場景

1、抗體藥物研發(fā)

掌握全長抗體序列是親和力成熟、人源化改造、穩(wěn)定性增強等工程操作的前提。

2、雜交瘤抗體重組表達

對失活或不可擴增的雜交瘤細胞進行抗體測序，可實現(xiàn)重組表達，提高生產(chǎn)一致性。

3、生物類似物開發(fā)

通過測序獲得參考抗體序列，有助于功能復現(xiàn)與結(jié)構(gòu)優(yōu)化，推動仿制藥開發(fā)。

4、zhuānlì注冊與知識產(chǎn)權(quán)保護

測序數(shù)據(jù)作為原始技術(shù)資料，支持抗體zhuānlì撰寫、注冊備案及技術(shù)交底。

5、學術(shù)研究與發(fā)表需求

對已有抗體產(chǎn)品進行測序，有助于文獻中數(shù)據(jù)的可復現(xiàn)性與方法透明性。

抗體測序作為連接抗體發(fā)現(xiàn)與工程改造的關(guān)鍵橋梁，其準確性直接影響科研效率與產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化成功率。通過優(yōu)化酶解策略、提升質(zhì)譜性能、強化拼接算法，科研人員能夠獲取完整可信的抗體序列，為結(jié)構(gòu)分析、功能優(yōu)化與藥物開發(fā)提供堅實基礎(chǔ)。百泰派克生物科技致力于為生命科學研究者提供高質(zhì)量、標準化、可驗證的抗體測序服務(wù)。如您在項目中面臨抗體序列缺失、功能區(qū)不明或zhuānlì支持需求，歡迎隨時聯(lián)系我們，獲取zhuānyè技術(shù)方案與一對一服務(wù)支持。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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