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技術(shù)文章
IHC，ELISA和WB實(shí)驗(yàn)比較
點(diǎn)擊次數(shù)：4894 發(fā)布時(shí)間：2011-9-28
IHC，ELISA和WB實(shí)驗(yàn)比較
免疫組化、Western、ELISA，免疫學(xué)三大工具，分別用于定位，定性和定量。
IHC（免疫組化Immunohistochemistry）
是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 （熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色，來(lái)對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究（主要是定位）。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Enzyme linked immunosorbent assay）
用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上 開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。
WB （蛋白質(zhì)印跡Western Blot）
先要進(jìn)行SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來(lái)檢測(cè)樣品，可以用于定性和半定量。
對(duì)于IHC來(lái)說(shuō)，定位是免疫組化zui大的優(yōu)勢(shì)。該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。
WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確；當(dāng)然WB也可定性和定位（通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位），但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。
ELISA與免疫組化技術(shù)相比，定量zui準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測(cè)方法之一。尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果。IHC針對(duì)性比較強(qiáng)，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽(yáng)性或者陰性，一般不用于定量檢測(cè)。