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技術(shù)文章
凋亡試劑盒使用9大注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù)：1602 發(fā)布時(shí)間：2015-10-13
凋亡試劑盒使用9大注意事項(xiàng)
1. 進(jìn)行PBS 清洗時(shí)，每次清洗5分鐘左右。
2. PBS清洗后，為了各種反應(yīng)的有效進(jìn)行，請(qǐng)盡量除去PBS 溶液后再進(jìn)行下一步反應(yīng)。
3. 在載玻片上的樣本上加上實(shí)驗(yàn)用反應(yīng)液后，請(qǐng)蓋上蓋玻片或保鮮膜，或在濕盒中進(jìn)行，這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體，又可以防止反應(yīng)液干燥造成實(shí)驗(yàn)失敗。
4. TUNEL反應(yīng)液臨用前配制，短時(shí)間在冰上保存。不宜長(zhǎng)期保存，長(zhǎng)期保存會(huì)導(dǎo)酶活性的失活。
5. 如果20×DAB 溶液顏色變深成為紫色，則不可使用，需重新配制。
6. 用甲基綠（Methyl Green）染液（3-5%甲基綠溶于0.1M 醋酸巴比妥 PH4.0）染色后，請(qǐng)用滅菌蒸餾水清洗多余的甲基綠。然后進(jìn)行洗凈（100%乙醇）、脫水（二甲苯）透明、封片后通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察操作。如果此時(shí)使用80~90%的乙醇洗凈時(shí)，甲基綠比較容易脫色，注意快速進(jìn)行脫水操作。
7. 熒光素標(biāo)記的dUTP液含甲次*酸鹽和二氯鈷等致癌物，可通過(guò)吸入、口服等途徑進(jìn)入機(jī)體，注意防護(hù)。
8. 試劑保存；未打開(kāi)的試劑盒貯存在-20℃（-15~25℃）；converter -POD液一旦解凍，凋亡試劑盒以后就保存在4℃（2~8℃）下，至少在6 m內(nèi)穩(wěn)定，避免再次凍存；TUNEL反應(yīng)液臨用前配好后，放至冰上直至使用。
9. 結(jié)果分析時(shí)注意：在壞死的晚期階段或在高度增殖/代謝的組織細(xì)胞中可產(chǎn)生大量DNA斷裂，從而引起假陽(yáng)性結(jié)果；而有些類(lèi)型的凋亡性細(xì)胞死亡缺乏DNA斷裂或DNA裂解不*，凋亡試劑盒以及細(xì)胞外的矩陣成分阻止TdT進(jìn)入胞內(nèi)反應(yīng)，進(jìn)而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。