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技術文章
地高辛檢測
點擊次數(shù)：2482 發(fā)布時間：2016-3-24
地高辛標記技術源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇物質—Digoxidenin（DIG）。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxidenin在自然界中的*來源，因此抗DIG的抗體不會與其他的生物物質結合，從而可以滿足特異性標記的需要。這一點，正式DIG勝于生物素的（Biotin）的地方—同樣是小分子標記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說，樣品自身含有的內源生物素，就會對結果產生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。
- 地高辛技術特點
- 可用于標記核苷酸或蛋白質
- 檢測方法：顯色法、熒光或化學發(fā)光法
- 安全環(huán)保，不接觸放射性物質，不會對環(huán)境造成污染
- 曝光時間短，結果顯示時間以分鐘計算，無需幾小時甚至幾天的自顯影過程
- 地高辛標記的探針至少可貯存一年以上，可一次大量制備
- 可輕松進行探針剝離和重探
2. 應用領域
地高辛系統(tǒng)能夠安全地標記DNA、RNA或是寡聚核苷酸探針，這些探針可以廣泛應用在：
- Southern blot,Northern blot,dot blot
- 菌斑雜交
- Microarray
- ELISA
- 原位雜交
3. 技術細節(jié)
DIG 通過一個含有11個碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5位置相連，一定濃度的DIG標記的核苷酸可以通過DNA polymerase(如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端轉移酶（Terminal Transferase）的作用摻入到核苷酸探針中；也可通過隨即引物標記（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端標記/加尾或是體外轉錄制備帶有DIG標記的探針。當然也可以通過化學合成的方法進行核苷酸的標記。