抽檢方案優(yōu)化｜焦糖色素中4-甲基咪唑的測定方法優(yōu)化

焦糖色素作為食品著色劑，能夠為產(chǎn)品提供棕褐色的色澤以及焦糖te有的香氣，在食品加工中有著廣泛的應(yīng)用[1]，尤其是飲料、調(diào)味品等產(chǎn)品。目前，焦糖色素主要通過加熱糖類生成，氨法、亞硫酸銨法的生產(chǎn)過程中引入-NH2化合物，會產(chǎn)生4-甲基咪唑等含氮雜環(huán)副產(chǎn)物。4-甲基咪唑為2B類致癌物[2]，長時間攝入可能存在健康風險。

4-甲基咪唑結(jié)構(gòu)式

《食品安全國家標準 食品添加劑 焦糖色》(GB 1886.64-2015)對4-甲基咪唑有明確的限liang要求200mg/kg(限氨法、亞硫酸銨法檢測)。標準附錄中的檢測方法采用固液支撐萃取法處理樣品，需將樣品提取液與硅藻土混合攪勻，吸附飽和后，手動填裝玻璃層析柱，再以大體積二氯甲烷(200mL)洗脫，水浴濃縮后再上GC-FID測定，操作復雜且耗時較長，重現(xiàn)難度較大。

SGLC可提供針對4-甲基咪唑測定的改進方法，采用島津 SHIMSEN Styra SLE 產(chǎn)品對焦糖色樣品進行凈化， SH-PolarX 色譜柱進行分離，大幅減少洗脫液體積的基礎(chǔ)上，操作更便捷，保證良好的峰形、回收率和重現(xiàn)性。具體方案信息如下。

SH-PolarX

Shimadzu GC-2030 氣相色譜儀；

純水機： PR-FP-0120α-MT1（ + 60L 水箱 + 取水器）

色譜柱： SH-PolarX（堿改性聚乙二醇固定相，30 m × 0.25 mm × 0.25 μm； P/N： 227-36294-01）；

固相萃取小柱： SHIMSEN Styra SLE（硅藻土填料，10 g/60 mL； P/N： 380-00927-05）；

SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器（ P/N： 380-00341）；

GC-MS 認證樣品瓶 LabTotal Vial（ P/N： 227-34002-01）；

Nichipet Air 移液槍： Nichipet Air 0.5-10 μL（ P/N： 00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（ P/N： 00-NAR-100）；

Nichipet Air 100-1000 μL（ P/N： 00-NAR-1000）；

Nichipet Air 1000-10000 μL（ P/N： 00-NAR-10000）。

色譜柱： SH-PolarX（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm； P/N： 227-36294-01）；

升溫程序： 190 ℃恒溫保持 30 分鐘

載氣： N2

進樣口溫度： 200 ℃

分流模式：分流（20： 1）

控制模式：恒線速度（31.3 cm/s）

初始流速： 1.0 mL/min

檢測器： FID，溫度： 220℃

進樣量： 1 μL

準確稱取 5.0 g 試樣至 50 mL 塑料離心管中， 加 5 mL 3 mol/L 氫氧化鈉溶液，劇烈振蕩混合 1 min，使樣品充分溶解，待凈化。

SHIMSEN Styra SLE（ 10 g/60 mL； P/N： 380-00927-05）

將 SLE 小柱連接流量控制閥(PN: 380-00930-08)，放置在滴落裝置上。打開流量控制閥，將上述離心管中提取液全部轉(zhuǎn)移至小柱， 待提取液全部流入萃取柱中， 向塑料離心管中加入 5 mL 3 mol/L 氫氧化鈉溶液，充分潤洗后轉(zhuǎn)移至小柱中， 待潤洗液全部流入小柱中， 繼續(xù)向塑料離心管中加入 5 mL 含有 1%甲醇的二氯甲烷，充分潤洗后，轉(zhuǎn)移入小柱中，待全部流入小柱，關(guān)閉流量控制閥，靜置 5 min。 分批向小柱中加入 65mL 含有 1%甲醇的二氯甲烷，使用 250 mL 蒸餾燒瓶收集全部洗脫液(注意：由于溶劑的揮發(fā)性，建議在通風櫥中進行過柱操作)。 在 35℃水浴下減壓蒸餾至近干，用丙酮洗滌蒸餾瓶數(shù)次，洗滌液全部轉(zhuǎn)移至 5 mL 容量瓶中，用丙酮定容至刻度，混勻， 待上機分析。

圖1 樣品前處理示意圖

SH-PolarX

4-甲基咪唑標準品色譜圖（200 μg/mL）

焦糖色樣品色譜圖

焦糖色樣品加標色譜圖（添加濃度：200 mg/kg）

對焦糖色樣品加標（添加濃度：200 mg/kg），按照上述前處理方法處理后上機，平行3份樣品考察回收率和RSD，結(jié)果顯示，4-甲基咪唑加標回收率為92.33%，RSD為6.46%，回收率高，重現(xiàn)性好。

SH-PolarX

本文建立了焦糖色中4-甲基咪唑的GC測定方法。參照食品安全國家標準GB 1886.64-2015前處理方法并進行優(yōu)化，采用島津SHIMSEN Styra SLE產(chǎn)品對焦糖色樣品進行凈化，SH-PolarX色譜柱進行分離。對焦糖色樣品加標（添加濃度：200 mg/kg），按照上述前處理方法處理后上機，平行3份樣品考察回收率和RSD，結(jié)果顯示，4-甲基咪唑加標回收率為92.33%，RSD為6.46%，回收率高，重現(xiàn)性好。該方法可為焦糖色中4-甲基咪唑的測定提供參考。

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