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scarabgenomics E-0742說明書

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scarabgenomics E-0742說明書

 

MDS™42 Electrocompetent Cell Kit

Product

E-0742-05K - MDS™42 Electrocompetent Cells

E-0742-10K - MDS™42 Electrocompetent Cells

E-0742-20K - MDS™42 Electrocompetent Cells

 

· 維持和繁殖不穩(wěn)定的克隆和質(zhì)粒 - 攜帶直接重復(fù)序列,反向重復(fù)序列或?qū)е旅黠@的二級“莖 - 環(huán)”結(jié)構(gòu)的其他序列的pDNA載體在標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌宿主中通常是不穩(wěn)定的。CleanGenome® 大腸桿菌菌株經(jīng)常用于克隆在其他菌株中遭受不需要的重組事件的序列。

· 準(zhǔn)確的質(zhì)粒復(fù)制 - 從CleanGenome® 大腸桿菌菌株中刪除了重組或移動DNA元件,如插入元件,以確保您的構(gòu)建體的忠實復(fù)制。

· 克隆和表達“有害”基因 - 清除Genome® 大腸桿菌菌株的自然防御系統(tǒng),例如IS變異“有害”基因以阻止對生物體的壓力,已被刪除,因此它們不會干擾您的實驗。

背景:

使用合成生物學(xué)方法,通過進行一系列計劃的,的缺失來減少大腸桿菌K-12基因組。多重缺失系列(MDS™)菌株(1),基因組減少高達15%,通過鑒定非必需基因和消除序列,包括重組或移動DNA和神秘毒力基因,同時保持強勁生長而設(shè)計和蛋白質(zhì)生產(chǎn)?;蚪M減少還導(dǎo)致意想不到的有益特性,包括高電穿孔效率和重組基因和在其他菌株中不穩(wěn)定的質(zhì)粒的準(zhǔn)確繁殖。隨后的缺失和有用等位基因的引入產(chǎn)生適合于許多分子生物學(xué)應(yīng)用的菌株。

 


圖1:多個缺失菌株耐受“有害”基因。 
由霍亂毒素B亞單位(CTX)融合的兔出血癥病毒VP60組成的嵌合基因在大腸桿菌中非常不穩(wěn)定。單獨地,兩個基因在E中都是穩(wěn)定的。大腸桿菌HB101,C600和DH10B,但在相同宿主中攜帶融合基因的pCTXVP60不產(chǎn)生融合蛋白,并且以低產(chǎn)率回收。所有回收的質(zhì)粒都含有CTXVP60開放閱讀框中的突變,幾乎全部來自IS插入。相反,重組質(zhì)粒在MDS TM中*穩(wěn)定; 獲得了正常的質(zhì)粒DNA產(chǎn)量。pCTXVP60的代表性限制性模式。(A)將來自MDS TM 42的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化并在的宿主中繁殖,然后用NcoI和EcoRI消化。純化每個限制性模式的代表并測序。M,分子量標(biāo)記,1 kbp階梯; 1,MDS™41,無插入; 2,MDS™42,無插入; 3,DH10B,IS10插入; 4,DH10B,IS10插入/刪除; 5,C600,IS5插入; 6,C600,IS1插入; 7,C600,IS1插入。




圖2:不同宿主菌株中的質(zhì)粒穩(wěn)定性。 
左:在pT-ITR的四次傳代培養(yǎng)期間,具有病毒LTR區(qū)段的質(zhì)粒; 泳道0,傳代培養(yǎng)前分離的質(zhì)粒DNA,泳道1-4,連續(xù)傳代培養(yǎng)。用限制酶消化質(zhì)粒DNA,并通過瓊脂糖凝膠電泳分析。KpnI在單個位點切割質(zhì)粒,但在MG1655中,兩個條帶表明質(zhì)粒缺失。MscI在兩個位置切割,但在MG1655中,第三個中間帶確認(rèn)質(zhì)粒被刪除。右圖:慢病毒表達質(zhì)粒的四種變體在MDS TM42ΔrecA和Stbl3 TM(Life Technologies)中的穩(wěn)定性,顯示含有完整質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化體的比例(表2 BioTechniques 43:466-470(2007年10月))(2)。

 

 

試劑盒組分 
MDS™42電感受態(tài)細(xì)胞試劑盒
pUC19對照DNA(10 pg /μl)
SOC培養(yǎng)基

基因型 
MG1655多重缺失菌株(1)

質(zhì)量控制 
使用pUC19對照DNA一式兩份測試轉(zhuǎn)化效率。將轉(zhuǎn)化的細(xì)胞接種到含有50μg/ ml羧芐青霉素的LB平板上。轉(zhuǎn)化效率> 5×10 9 cfu /μgDNA。

儲存條件將 
組分儲存在-80°C。不要將細(xì)胞儲存在液氮中。

 

 

 

 

 

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上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營超過700多品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

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