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上海起發(fā)genelink 26-4000-03說明書

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上海起發(fā)genelink 26-4000-03說明書

Random Primers Unlabeled

數(shù)量100μg

運輸條件下 室溫

儲存-20攝氏度



描述
隨機引物是代表該大小的所有可能序列的寡核苷酸的混合物。與使用六聚體(1,2)和cDNA合成類似,隨機引物可用于在低聚物標記中引發(fā)合成。
隨機引物標記產(chǎn)生高比活性標記DNA探針,可用于所有南方、北方和原位雜交研究。隨機引物也可以類似于在cDNA合成中使用六聚體與寡聚體d(T)組合來產(chǎn)生更多的5'端cDNA序列。
最近,隨機引物被用來檢測DNA多態(tài)性。這些多態(tài)性,簡單地被檢測為DNA的片段,從父母一方擴增而不是從另一方擴增,是以孟德爾的方式遺傳的,可以
可用于構(gòu)建多種物種的遺傳圖譜。作者建議,這些多態(tài)性被稱為RAPD(發(fā)音快速)標記,在隨機擴增多態(tài)性DNA之后(3)。
重建
建議在無核糖核酸酶的DEPC處理水中以50µM(50 pmol/µl)的濃度或10mM Tris pH 8.0進行重組。儲備溶液可根據(jù)需要進一步稀釋至適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛取?br/>為了制備50μM的底漆溶液,使用凍干低聚物的“nmol/100µg"值并乘以20,以確定要添加的稀釋液體積(以微升計)。
公式:
“總nmol"x 20=要添加的稀釋劑μl。
-短時間旋轉(zhuǎn)試管,將運輸過程中可能卡在瓶蓋中的試管內(nèi)容物卸下。
顆??赡芊浅P。豢梢?。
-直接向試管中加入適量的無核糖核酸酶水或10mM Tris pH 8.0。旋渦。
-上述溶液為50µM。這相當(dāng)于50 pmol/µl。
熒光標記探針應(yīng)避光,以避免光漂白。
在零下20點儲存
重建后C或以下。
推薦用法
在20µl反應(yīng)體積中,使用4µl 50µM溶液中的1µg DNA或RNA作為模板。
詳見反應(yīng)條件。
質(zhì)量控制數(shù)據(jù)
該產(chǎn)品通過逆轉(zhuǎn)錄酶和聚(A)蛋白被證明能引發(fā)第一鏈cDNA反應(yīng)+
RNA作為模板
使用klenow DNA聚合酶在隨機引物標記反應(yīng)中進行探針標記。
功能分析條件
下面給出的條件已經(jīng)過測試,以產(chǎn)生第一鏈cDNA合成,并給出了一個例子。使用該產(chǎn)品的其他實驗室已經(jīng)使用了各種變體和其他方案,以產(chǎn)生出色的第一鏈合成。研究人員可以替代他們自己的反應(yīng)條件。
RNA的質(zhì)量對逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)非常重要。必須有完整的全長RNA作為模板材料,不含微量RNA酶和污染性化學(xué)物質(zhì)。低質(zhì)量的RNA模板通常是導(dǎo)致cDNA產(chǎn)物截短和不完整的原因。




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