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植物總DNA的提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測
最近更新時間:2016-5-11
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核酸的存在形式:
脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)
與蛋白質(zhì)結合在一起以核蛋白(DNP)的形式存在。在制備核酸時通常破壞細胞壁及細胞膜來使核蛋白釋放出來。
植物總DNA包括細胞核DNA和細胞核外DNA,前者存在于細胞核內(nèi),后者存在于細胞質(zhì)中有半自主性復制活性的細胞器內(nèi),例如線粒體DNA(mtDNA)和葉綠體DNA(ctDNA)。
核酸的理化性質(zhì):
DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物, RNA的純品呈白色粉末或結晶。核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶于水。
在酸性溶液中,核酸易水解,中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。
基本過程:
細胞破碎→抽提去蛋白質(zhì) →沉淀核酸
植物總DNA的提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測
細胞破碎:
①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;
②化學試劑法:用SDS處理細胞;
③酶解法: 加入溶菌酶或蝸牛酶,破壞細胞壁。
DNA提?。?br />1.SDS法 SDS是有效的陰離子去垢劑, 細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間 常借靜電引力或配位鍵結合, SDS能夠破壞這種價鍵。
2.CTAB法 CTAB是一種陽離子去垢劑,它可以溶解膜與脂膜,使細胞中的DNA-蛋白質(zhì)復合物釋放出來,并使蛋白質(zhì)變性,使DNA與蛋白質(zhì)分離。