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DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列有專一性要求么?
最近更新時間：2016-8-4
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一、矛盾之處：
(一)DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列不具有專一性要求
支持這一觀點的是2008年江蘇高考32題，請看具體內容及圖示，如下：
32.(8分)將動物致病菌的抗原基因導入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關的圖和表。
<img alt="DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列有專一性要求么?" dna連接酶對所連接的dna兩端堿基序列是否有專一性要求"="" border="1" height="455" data-cke-saved-src="http://www.bio1000。。ｃｏｍ/uploads/allimg/120503/1022461952-0.jpg" src="http://www.bio1000。。ｃｏｍ/uploads/allimg/120503/1022461952-0.jpg" width="544" style="vertical-align: middle; border: 0px;">
由此題我發(fā)現(xiàn)，目的基因由兩種限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;載體質粒由兩種限制酶切開，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在構成重組質粒時，兩個黏性末端堿基互補，由DNA連接酶可以連接上磷酸二酯鍵，這沒有疑議。但是另一端兩個平末端也能由DNA連接酶連接上，并且原題中第(3)問“圖1步驟③所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求? 。”答案為“否”。
也就是由此題我們可以得出一個結論：DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列不具有專一性要求，它可以連接任意的平末端。
(二)DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列具有專一性要求
請大家參看選修三《現(xiàn)代生物技術專題》第7頁“思考與探究”的*題，如下：
“1.限制酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎?以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段：
(1) …CTGCA (2) …AC (3) GC…
…G …TG CG…
(4) …G (5) G… (6) …GC
…CTTAA ACGTC… …CG
(7) GT… (8)AATTC…
CA… G…
你是否能用DNA連接酶將它們連接起來? ”
《教師教學用書》第11-12頁分別給出參考答案，具體內容為：
2和7能連接形成…ACGT…
…TGCA…;
4和8能連接形成…GAATTC…
…CTTAAG…;
3和6能連接形成…GCGC…
…CGCG…;
1和5能連接形成…CTGCAG…
…GACGTC…