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R&D Systems ELISA產(chǎn)品常見問題解答
問：什么是R&D Systems的抗體配對？
答：R&D Systems的抗體配對是一個自己動手的產(chǎn)品。R&D Systems建議此產(chǎn)品的使用者在免疫測試的開發(fā)方面應(yīng)很有造詣。使用者必須以經(jīng)驗(yàn)為依據(jù)來決定捕獲抗體和測試抗體的*濃度。R&D Systems的重組細(xì)胞因子并未經(jīng)ELISA校正，所以在使用前必須經(jīng)ELISA做質(zhì)量校正。更多有關(guān)ELISA開發(fā)的信息可以參照我們的ELISA開發(fā)指網(wǎng)：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx
問：Quantikine和QuantiGlo ELISA試劑盒有何不同？
答：R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA試劑盒是一種比色法檢測，需要一臺標(biāo)準(zhǔn)讀光儀配備有合適的濾光片可用于讀數(shù)和光波長校正。QuantiGlo ELISA試劑盒采用了一種熒光底物，計數(shù)為光流明或相對光單位（RLU）。因此，QuantiGlo ELISA試劑盒需要有熒光讀光儀。這種熒光讀光儀需設(shè)置在：1.0分鐘的滯待時間；1.0秒/孔的讀數(shù)時間；累計狀態(tài)；自動獲取開啟。R&D Systems使用Dynex Technologies的熒光讀光儀。
問：普通Quantikine ELISA試劑盒同高靈敏Quantikine ELISA試劑盒有何不同？
答：高靈敏Quantikine ELISA試劑盒一般用于非常低量的細(xì)胞因子的檢測，比如正常人（健康狀態(tài)時）的血清和血漿。當(dāng)普通Quantikine試劑盒一般檢測不到（或幾乎檢測不到）正常人血清和血漿中的細(xì)胞因子，可選擇高靈敏Quantikine。我們建議實(shí)驗(yàn)者先查閱文獻(xiàn)資料來確定試驗(yàn)的測試范圍以選擇所需的試劑盒的種類。
問：R&D Systems的Quantikine試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經(jīng)檢驗(yàn)的）樣本？
答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對Quantikine系列的試劑盒做效果驗(yàn)證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實(shí)驗(yàn)者先做一個“摻入和回收預(yù)試驗(yàn)”。簡單來說，實(shí)驗(yàn)者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標(biāo)準(zhǔn)，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率（%）：測試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來說，回收率在80-120%可認(rèn)為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實(shí)驗(yàn)室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細(xì)的“摻入和回收”的實(shí)驗(yàn)步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)看一看是否有其他試驗(yàn)人員用我們的產(chǎn)品做過不同的樣本，或不同的屬種。
問：加入稀釋劑是否會將樣本進(jìn)一步稀釋？
答：因?yàn)橄♂寗┦羌尤氲剿械目字?，?biāo)準(zhǔn)和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。
問：我是否可將標(biāo)準(zhǔn)曲線的兩端延伸？
答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在我們確定的測試范圍，我們保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。
問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗(yàn)的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。
問：Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換？
答：如果試劑盒（RD1-, RD5-, RD6-）中的稀釋劑有相同的組件號和批量號，它們可以互換。R&D Systems做“整個試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說，我們不支持不同批號之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。
問：Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換？
答：如果組件號相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅(qū)動的信號擴(kuò)增。
問：在某些實(shí)驗(yàn)中為什么必須使用聚丙烯（polypropylene）的試管做標(biāo)準(zhǔn)稀釋？
答：有些細(xì)胞分子會粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。
問：在Quantkine試劑盒中沒有足夠的RD5校正物來稀釋我的細(xì)胞上清液，我該怎么辦？
答：你可用細(xì)胞培養(yǎng)液來做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來稀釋。
問：我的Quantikine試劑盒中的RD1測試稀釋劑看上去有沉淀物，可以用嗎？
答：有些RD1測試稀釋劑的確有不同程度的沉淀物。在這種情況下，我們在實(shí)驗(yàn)步驟手冊中已做紀(jì)錄。
問：標(biāo)準(zhǔn)曲線為什么要采用4-pl擬合？
答：R&D Systems在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的Quantikine ELISA試劑盒時，采用4-相參數(shù)的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個的選擇。
問：試驗(yàn)步驟中說要用500 rpm，我的搖床達(dá)不到。這個速度是正確的嗎？
答：500 rpm使用的是
問：我有太大變異系數(shù)（CV）的問題，是怎么回事？
答：zui大但不是*的兩個原因，可能是移液誤差和清洗方式。你可參照我們的《如何成功地操作ELISA指導(dǎo)》，：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.aspx
問：Quantikine ELISA試劑為什么需要做稀釋？
答：主要有兩個原因：一，在絕大多數(shù)的樣本中細(xì)胞因子的含量非常高，如不經(jīng)稀釋，讀數(shù)將高于標(biāo)準(zhǔn)曲線；二，也是zui普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質(zhì)效應(yīng)稀釋掉。
問：我是否可以在任何過夜步驟停止Quantikine試驗(yàn)、延長溫育時間、或提高溫育的溫度？
答：R&D System不建議對任何Quantikine ELISA延長溫育時間。而且，當(dāng)實(shí)驗(yàn)步驟改變了，我, , 們無法保證Quantikine ELISA的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。R&D System做“整個試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說我們無法支持改變過的實(shí)驗(yàn)步驟，因?yàn)樗鼈兾唇?jīng)質(zhì)量控制。延長溫育時間、或提高溫育溫度以縮短溫育時間會提高實(shí)驗(yàn)的本底（又名空白或零標(biāo)準(zhǔn)）。這樣一來，樣本和標(biāo)準(zhǔn)中的低量細(xì)胞因子會測不到，因?yàn)樵龈吡说谋镜仔盘枌乃锌字械臄?shù)值中差減。
問：我用了DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)，但幾乎就沒有顏色產(chǎn)生。那些步驟可能出了問題？
答：很多方面都會影響到顏色的產(chǎn)生。比如：
1） BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELISA級別的BSA很重要，可以降低球蛋白對實(shí)驗(yàn)的干擾。R&D Systems建議使用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。
2） 非室溫下的試劑在使用時會抑制信號；如果室溫過低，信號也會被抑制。
3） 如果使用了未表明為“高結(jié)合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結(jié)合就不牢固，從而導(dǎo)致測試的顏色產(chǎn)生過低。
4） 任何試劑，如果配制出錯、儲藏不當(dāng)、或已過期，都將出現(xiàn)這一問題。
5） 讀板時使用的波長同低物的波長不一致。
問：我是否可以使用你們的抗體配對ELISA中的抗體，但用另一家公司的蛋白為標(biāo)準(zhǔn)？
答：若使用一家公司的抗體而用另一家公司的標(biāo)準(zhǔn)的帶來問題是它們會有不同的免疫活性（或不同的抗體與重組蛋白的結(jié)合力）。這種現(xiàn)象的出現(xiàn)是因?yàn)樽鳛闃?biāo)準(zhǔn)的重組蛋白同作為抗體免疫原的重組蛋白在蛋白序列或折疊中會有所不同，如果蛋白序列或折疊的不同發(fā)生在抗體結(jié)合部位，就會引起抗體對重組蛋白標(biāo)準(zhǔn)的不識別或識別很差。
