上海信帆生物：人血漿中緩激肽定量檢測方法開發(fā)

緩激肽是一種含有9種氨基酸的生理和藥理活性肽，由蛋白質(zhì)的激肽基團衍生而來。激肽是可以促使血管舒張、血管通透性增強、一氧化氮釋放和花生四烯酸流動的效應因子。它是血壓、腎功能和心臟功能的重要調(diào)節(jié)因子，還參與炎癥反應。緩激肽可引起血管擴張，從而導致血壓降低。

因此，對這種激素肽的變化進行高靈敏度、高選擇性和高準確度地定量，并將其作為疾病進展或藥物治療的評估指標，將會極為有利。盡管以往都是通過配體結(jié)合試驗(LBAs)對生物制劑進行定量分析，但在過去幾年中利用LC-MS/MS分析大分子已成為一種趨勢。這在某種程度上是因為LBAs產(chǎn)生顯著的交叉反應問題并且缺乏標準化。

LC-MS/MS具有多種優(yōu)勢，例如開發(fā)時間更短、準確度和精度更高、可重復進樣，并且容易區(qū)分相似度很高的類似物、代謝物或內(nèi)源性干擾物。常見的肽通常難以通過LC-MS/MS進行分析，這是因為其不易離子化以及不易產(chǎn)生理想的碎片離子而導致MS靈敏度較低，從而使得LC和樣品制備方法開發(fā)非常困難。由于緩激肽在血漿中的濃度低至pg/mL水平且代謝速度快，在采血和樣品制備過程中還可通過蛋白水解人為生成，因此對其進行準確定量相當困難。

本研究采用了專門設計的血液收集技術(shù)以防止體外緩激肽的形成，并且利用混合型固相萃取(SPE)和實心核顆粒色譜柱，zui大限度降低并消除基質(zhì)干擾的同時提高定量分析的靈敏度。

應用優(yōu)勢

■ 使用CORT ECS™ UPLC^®色譜柱有利于獲得較窄的峰寬、改善靈敏度和分離度，并消除基質(zhì)干擾

■ 采用Oasis^®WCX(一種混合型吸附劑)的SPE方法降低了基質(zhì)干擾并提高了血漿中緩激肽提取的選擇性

■ Oasis μElution96孔板可濃縮樣品，并在zui大程度上減少肽損失，使血漿中緩激肽的檢測限達到5 pg/mL

■ 選擇性高的快速SPE提取(<30 分鐘)省去了耗時的免疫親和純化步驟

■ Xevo^®TQ-S MS可實現(xiàn)與免疫檢測方法相匹配的高靈敏度，但與后者相比更加省時省力

■ 與傳統(tǒng)LBA方法相比更為準確精密

■ 分析速度快，只需3.5分鐘，大大提高了工作效率

沃特世解決方案

ACQUITY UPLC^®系統(tǒng)

Xevo TQ-S質(zhì)譜儀

CORTECS UPLC C18色譜柱

Oasis WCX 96孔µElution提取板

ACQUITY^®96孔收集板

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