一、使用前準(zhǔn)備

1. 選型適配

   
   

   根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選截留分子量（MWCO）合適的超濾管，通常不超過目標(biāo)蛋白分子量的1/3，如35kDa蛋白可選10kDa截留量超濾管。同時，確認(rèn)超濾膜材質(zhì)與樣本化學(xué)性質(zhì)兼容，按樣本體積選容量規(guī)格，確保液面不超管頂標(biāo)識線。

2. 預(yù)處理

   
   

   新超濾管可能含保護(hù)劑，需用純水或緩沖液浸泡后離心（1000×g，1分鐘）去除殘留。將其置于4℃冰箱預(yù)冷10分鐘，再放冰上預(yù)冷2 - 5分鐘，防膜變形或蛋白變性。若不立即使用，用20%乙醇浸泡，保持膜濕潤，避免干裂長菌。

二、操作流程

1. 加樣與平衡

   
   

   倒置離心去除殘留水后，輕柔加樣本，避免劇烈晃動。將超濾管對稱放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子，確保質(zhì)量重心平衡，防離心機(jī)震動。

2. 離心參數(shù)

   
   

   根據(jù)規(guī)格調(diào)整轉(zhuǎn)速（5000 - 12000×g），離心15 - 40分鐘，如10kDa截留量超濾管常用12000×g離心30分鐘。調(diào)低加速度，減少對膜沖擊。離心機(jī)預(yù)冷至4℃，防蛋白變性。離心后檢查管底有無蛋白沉淀，有則分析調(diào)整。

三、樣本收集與后續(xù)

1. 回收濃縮液：用移液槍輕柔吸取或倒置離心回收，避免觸碰膜面。

2. 置換緩沖液：濃縮至1mL后加新緩沖液，重復(fù)3次。

3. 清洗保存：一次性超濾管用后丟棄；可重復(fù)使用的經(jīng)純水、乙醇清洗消毒，短期用75%乙醇浸泡，長期用20%乙醇保存。

四、注意事項

控制離心力、正確放置方向防膜破損；預(yù)留足夠樣本量防損失；冰上操作、消毒防污染。