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細(xì)胞培養(yǎng)的污染有哪些類(lèi)型

閱讀:758      發(fā)布時(shí)間:2022-8-10
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細(xì)胞培養(yǎng)污染往往是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常遇到的問(wèn)題,有時(shí)會(huì)帶來(lái)十分嚴(yán)重的后果。細(xì)胞培養(yǎng)的污染物可分為兩大類(lèi),化學(xué)污染物,如培養(yǎng)基、血清和水的雜質(zhì)、內(nèi)毒素、增塑劑和洗滌劑;以及生物污染物,如細(xì)菌、霉菌、酵母、病毒、支原體,以及其他細(xì)胞系的交叉污染。雖然不可能*消除污染,但通過(guò)*了解其來(lái)源并遵循良好的無(wú)菌技術(shù),就可以減少其發(fā)生的頻率和嚴(yán)重性。

 

 



生物污染的主要類(lèi)型:



1

細(xì)菌污染

細(xì)菌是普遍存在的單細(xì)胞微生物。它們的直徑通常為幾微米,并且可以具有各種形狀,從球體到棒狀和螺旋狀。由于它們無(wú)處不在和生長(zhǎng)速度快,細(xì)菌以及酵母菌和霉菌是細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染物。

 

 

檢測(cè):在被感染后的幾天內(nèi),通過(guò)肉眼檢查培養(yǎng)物很容易檢測(cè)到細(xì)菌污染;受感染的培養(yǎng)物通常出現(xiàn)渾濁(即渾濁),有時(shí)表面有一層薄膜。培養(yǎng)基的 pH 值突然下降也經(jīng)常遇到。在低倍顯微鏡下,細(xì)菌表現(xiàn)為細(xì)胞間微小的移動(dòng)顆粒,在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個(gè)細(xì)菌的形狀。

 

 

2

霉菌污染

霉菌是真核微生物,以稱為菌絲的多細(xì)胞細(xì)絲形式生長(zhǎng)。這些多細(xì)胞細(xì)絲的連接網(wǎng)絡(luò)包含基因相同的細(xì)胞核,被稱為菌落或菌絲體。

 

 

檢測(cè):與酵母菌污染類(lèi)似,培養(yǎng)物的 pH 值在污染的初始階段保持穩(wěn)定,然后隨著培養(yǎng)物受到更嚴(yán)重的感染并變得渾濁而迅速增加。在顯微鏡下,菌絲體通常表現(xiàn)為細(xì)絲狀,有時(shí)表現(xiàn)為更密集的孢子團(tuán)。許多霉菌物種的孢子在其休眠階段可以在極其惡劣和不適宜居住的環(huán)境中生存,只有在遇到合適的生長(zhǎng)條件時(shí)才會(huì)被激活。

 

 

3

病毒污染

病毒是借助宿主細(xì)胞進(jìn)行繁殖的微觀感染因子。它們極小的個(gè)體大小使得它們很難在培養(yǎng)中檢測(cè)到,也很難從細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室使用的試劑中去除。因?yàn)榇蠖鄶?shù)病毒對(duì)其宿主有非常定向的依賴,它們通常不會(huì)對(duì)宿主以外物種的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生不利影響。然而,使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物可能對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員造成嚴(yán)重的健康危害,尤其是在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人類(lèi)或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)。

 

 

檢測(cè):細(xì)胞培養(yǎng)物的病毒感染可以通過(guò)電子顯微鏡、使用一組抗體的免疫染色、ELISA 測(cè)定或使用適當(dāng)病毒引物的 PCR擴(kuò)增來(lái)檢測(cè)。

 

 

4

支原體污染

支原體是沒(méi)有細(xì)胞壁的簡(jiǎn)單細(xì)菌,被認(rèn)為是最小的自我復(fù)制生物。由于它們的尺寸極?。ㄍǔP∮谝晃⒚祝?,支原體很難被檢測(cè)到,直到它們達(dá)到高的密度并導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物變質(zhì);在此之前,通常沒(méi)有明顯的感染跡象。

 

 

一些生長(zhǎng)緩慢的支原體可能會(huì)在培養(yǎng)物中持續(xù)存在而不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,但它們可以改變培養(yǎng)物中宿主細(xì)胞的行為和新陳代謝。

 

檢測(cè):慢性支原體感染可能表現(xiàn)為細(xì)胞增殖率降低、飽和密度降低和懸浮培養(yǎng)中的凝集;然而,可靠的檢測(cè)支原體污染的方法是定期使用熒光染色(例如,Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或微生物測(cè)定對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)。

 

 

5

酵母菌污染

酵母菌是單細(xì)胞真核微生物,大小從幾微米(通常)到 40 微米(很少)不等。

 

 

檢測(cè):與細(xì)菌污染一樣,被酵母菌污染的培養(yǎng)物會(huì)變得渾濁,尤其是當(dāng)污染處于晚期時(shí)。被酵母菌污染的培養(yǎng)物的 pH 值幾乎沒(méi)有變化,直到污染變得嚴(yán)重,在此階段 pH 值通常會(huì)增加。在顯微鏡下,酵母表現(xiàn)為單個(gè)卵形或球形顆粒。

 

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