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角分辨散射儀的操作經(jīng)驗(yàn)分享

閱讀:1129      發(fā)布時(shí)間:2022-6-22
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  角分辨散射儀是以特定頻率入射光照射這些粒子,它們不吸收入射光能量,而僅作為二次波源向各個(gè)方向發(fā)射與入射光頻率相同的球面散射光,這種沒有頻率位移(即無能量變化)的散射稱為彈性光散射(elastic light scattering),也常稱為經(jīng)典光散射(classical light scattering)、靜態(tài)光散射(static light scattering)在靜態(tài)光散射情況下,通常用來表征一個(gè)體系的散射能力和角度依賴性。
  角分辨散射儀譜操作規(guī)程:
  1、開機(jī)前準(zhǔn)備:水:蒸餾水,有機(jī)溶劑:色譜純。緩沖鹽溶液:配置完成后過2層0.22um濾膜。流動(dòng)相需準(zhǔn)備充足。
  2、系統(tǒng)平衡:根據(jù)需要選擇凝膠柱以及需要連接的檢測(cè)器。開啟脫氣機(jī),泵、柱溫箱、檢測(cè)器以及電腦開關(guān)。點(diǎn)擊quick start pump進(jìn)行流速設(shè)置,點(diǎn)擊ASTRA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方法設(shè)置。提前24小時(shí)將流速調(diào)至試驗(yàn)所需流速進(jìn)行系統(tǒng)平衡,其中注意流動(dòng)相過渡問題,待檢測(cè)器沖平后可進(jìn)行進(jìn)樣分析。
  3、進(jìn)樣:建議標(biāo)準(zhǔn)樣品歸一化處理,用于激光18角度校正,建議進(jìn)樣前進(jìn)行該處理。多糖需用3-5mg/mL分子量為五萬以下的右旋糖酐進(jìn)行激光,蛋白質(zhì)以2-4mg/mL的BSA作為歸一化樣品。所以樣品離心后取上層清液過0.45um濾膜。手動(dòng)進(jìn)樣器扳至load狀態(tài)進(jìn)行進(jìn)樣,一般需進(jìn)3-5倍進(jìn)樣環(huán)體積以清洗進(jìn)樣環(huán),點(diǎn)擊軟件中運(yùn)行后將進(jìn)樣器扳至Inject狀態(tài)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。
  4、數(shù)據(jù)分析:數(shù)據(jù)采集后需進(jìn)行定基線、峰等數(shù)據(jù)處理,依據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提前實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。所有數(shù)據(jù)可以通過圖表中郵件中edit進(jìn)行數(shù)據(jù)導(dǎo)出。
  5、關(guān)機(jī):色譜柱和系統(tǒng)清洗-流動(dòng)相沖洗2-3個(gè)小時(shí),根據(jù)流動(dòng)相性質(zhì)選擇合適溶劑過渡,如緩沖鹽流動(dòng)相沖洗后需用萬分之二疊代鈉清洗一晚上后換20%甲醇沖洗足夠時(shí)間后,進(jìn)行色譜柱保存,關(guān)閉儀器電源。實(shí)驗(yàn)完成后做好登記工作。


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