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流式檢測 T 細(xì)胞增殖的技巧

閱讀:2748      發(fā)布時(shí)間:2018-5-21
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集中于 T 細(xì)胞的許多基礎(chǔ)和臨床免疫研究包括增殖測定,都是為了確定 T 細(xì)胞是否能夠在不同的體外或體內(nèi)條件下增殖。流式細(xì)胞儀術(shù)是測量 T 細(xì)胞增殖的理想方法,現(xiàn)在有一套染色產(chǎn)品,可以在現(xiàn)有的流式細(xì)胞儀染色板中加入增殖染料。與所有流式細(xì)胞術(shù)染色步驟一樣,一定要做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定染色試劑的用量和確定采集的細(xì)胞數(shù),在下一個(gè) T 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)確定使用其中的一個(gè)染色方案來檢測細(xì)胞的增殖 。

胞內(nèi)熒光染色:

羧基熒光素二乙酸酯琥珀酰亞胺酯(CFSE)或類似的熒光染料是可以進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)的。在增殖期間,隨著細(xì)胞分裂熒光染料的濃度也隨之稀釋,并且可以在流式細(xì)胞檢測分析時(shí)作為離散峰測量多次細(xì)胞分裂。當(dāng)您在預(yù)實(shí)驗(yàn)中檢測這些染料時(shí),需確保這些增殖染料不影響細(xì)胞活性或形態(tài)。

流式檢測T1.jpg

DNA 合成:

細(xì)胞增殖還可以通過胸苷合成類似物 5-溴-2'-脫氧尿苷(BrdU)檢測細(xì)胞周期 S 期的 DNA 合成量來測定。通常在細(xì)胞培養(yǎng)中添加 BrdU 以確定體外增殖,并且使用抗 BrdU 的二抗與細(xì)胞內(nèi)因子結(jié)合來測量 BrdU 摻入。

流式檢測T2.jpg

 

以上 T 細(xì)胞增殖方法的可能有一種更適合您正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn),或者可用于您的流式細(xì)胞儀。每種方法都相對容易應(yīng)用到您的下一個(gè)實(shí)驗(yàn),并可以根據(jù)該檢測更好地了解細(xì)胞功能。
 

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