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NCI-H1734 (人非小細胞肺癌細胞)

細胞系收貨須知

收到的貨物會包含以下幾種類型，您的貨物屬于：

□細胞凍存管：收到貨物后，請檢查箱子里面是否還有干冰。

● 若干冰已剩余不多，不能掩埋凍存管，請及時拍照，并第一時間聯(lián)系銷售。

● 若干冰充裕，可以安排復蘇細胞；不安排復蘇，請將細胞凍存管轉移到液氮進行保存。短期（一周內）的存放可以放在-80冰箱，建議最好保存在液氮中。

□培養(yǎng)瓶的活細胞：收到請檢查培養(yǎng)瓶是否完好，是否有漏液，培養(yǎng)基是否渾濁

●若出現以上問題請于當天和我們銷售取得聯(lián)系，我們會第一時間為您處理。

● 若以上問題都沒有出現:拆掉培養(yǎng)瓶的外包裝，在顯微鏡下對細胞進行多個視野，不同倍鏡拍照。然后用酒精對瓶身進行消毒，放在37度二氧化碳培養(yǎng)箱中進行復溫。1-2小時后，拿出在顯微鏡下觀察，并進行多個視野不同倍鏡拍照。若細胞達到了可以傳代的密度，請及時進行傳代。若細胞密度不能進行傳代，請回收培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，留適量培養(yǎng)基在瓶中，并將培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。

□消化后的細胞懸液：收到請檢查管子是否有漏液

●若漏液，請當天和我們銷售取得聯(lián)系，我們會第一時間為您處理。

●若完好，將管子用酒精消毒，收集細胞懸液到離心管，1000轉，離心5分鐘，棄上清，加入培養(yǎng)基重懸，按照          比例分裝到     個T25培養(yǎng)瓶，并補充培養(yǎng)基到     ml即可

細胞操作詳細步驟----貼壁細胞

1.細胞復蘇

1.1離心法

1.1.1準備一個T25的細胞培養(yǎng)瓶并做好標記，預熱好的細胞培養(yǎng)基，一支15ml離心管，離心管中加入4-5ml細胞培養(yǎng)基。

1.1.2取出細胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.1.3將細胞懸液轉移到加有培養(yǎng)基的離心管中，1000轉離心5分鐘。

1.1.4倒掉上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細胞亦可先將細胞團彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

1.1.5將重懸好的細胞轉移到T25細胞培養(yǎng)瓶，補充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2不離心法

1.2.1準備一個T25的細胞培養(yǎng)瓶并做好標記，預熱好的細胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶中加入8ml左右培養(yǎng)基。

1.2.2取出細胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.2.3將細胞懸液轉移到加有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，十字搖晃，將細胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，接種16小時后更換培養(yǎng)基。

2.細胞傳代

2.1準備細胞培養(yǎng)基，細胞培養(yǎng)瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

2.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內細胞1-2次。

2.3加入1ml胰酶，室溫或者37度消化，直到細胞成片脫落，加入3-4ml培養(yǎng)基終止消化，如果有成團塊脫落的細胞可輕輕吹打分散細胞后再終止消化。（注意：消化時間與所用胰酶效價，消化時候細胞密度以及溫度等因素有關，建議第一次消化時候，多在顯微鏡下觀察，以找到最佳消化時間）

2.4收集細胞懸液，1000轉離心5分鐘，棄上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細胞亦可先將細胞團彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

2.5將重懸好的細胞按比例分裝至T25細胞培養(yǎng)瓶，補充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

3.細胞凍存

3.1準備細胞凍存液，細胞凍存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

3.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內細胞1-2次。

3.3加入1ml胰酶，室溫或者37度消化，直到細胞成片脫落，加入培養(yǎng)基終止消化，如果有成團塊脫落的細胞可輕輕吹打分散細胞后再終止消化。

3.4收集細胞懸液，1000轉離心5分鐘，棄上清。

3.5加入凍存液，重懸細胞，并分裝到凍存管，凍存密度0.8-1.5×10⁶細胞/ml。

3.6將凍存管放入程序降溫盒，并放到-80℃冰箱，過夜后將凍存管轉移到液氮保存。

4.注意事項

4.1建議收到細胞后先用我們配套的培養(yǎng)基和血清。收到活細胞的客戶培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同實驗室操作上會有些許差異，為了避免細胞不適應，請先按照說明書推薦的方法和操作步驟培養(yǎng)，待細胞凍存后可根據自己的習慣操作看細胞是否能夠適應。

4.3建議收到細胞后，前幾代及時凍存一些細胞，并最好是可以多凍存幾個批次
僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務。以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。