青海發(fā)光桿菌中蛋白質的提取實驗步驟

一、實驗試劑
采用T7 Tag Affinity Purification Kit
T7 Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29 mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137 mM NaCl，1%吐溫-20，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1 M檸檬酸，pH2.2 中和緩沖液：2 M Tris，pH10.4。 PEG 20 000。

二、實驗步驟
1. 100 ml 含重組表達質粒的菌體誘導后，離心5 000 g×5 min，棄上清，收獲菌體，用10 ml預冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4℃離心 14 000 g×30 min，取上清液，0.45 μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結合T7 Tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫，裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10 ml B/W緩沖液過柱，洗去未結合蛋白。
6. 用5 ml洗脫緩沖液過柱，每次1 ml，洗脫液用含150 μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24 h，中間換液數次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。

三、注意事項
青海發(fā)光桿菌蛋白在過層析柱前，要0.45 μm膜抽濾，否則幾次純化后，柱子中會有不溶物。

100667-200401 含量測定 50mg 依托度酸

100668-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸拓撲替康

100670-200401 含量測定 100mg 扎來普隆 

100672-200401 HPLC法含量測定 100mg 齊多夫定

100673-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸羅格列酮

100674-200301 含量測定 100mg 格列美脲 

100675-200301 檢查用 50mg 格列美脲雜質2

100677-200401 含量測定 100mg 苯溴馬隆

100679-200401 HPLC法含量測定 50mg 美洛昔康
青海發(fā)光桿菌