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PCR檢測(cè)試劑盒DNA復(fù)制用三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法

閱讀:2524      發(fā)布時(shí)間:2021-3-20
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   PCR檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)室檢查:
  一般檢查
  血常規(guī):部分病例可有白細(xì)胞和血小板減少。
 
  血清學(xué)檢查
  1.寨卡病毒IgM檢測(cè):采用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫熒光法等進(jìn)行檢測(cè)。
  2.寨卡病毒中和抗體檢測(cè):采用空斑減少中和試驗(yàn)檢測(cè)血液中和抗體。應(yīng)盡量采集急性期和恢復(fù)期雙份血清開(kāi)展檢測(cè)。
  寨卡病毒抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強(qiáng)的交叉反應(yīng),易于產(chǎn)生假陽(yáng)性,在診斷時(shí)應(yīng)注意鑒別。
 
  病原學(xué)檢查
  1.病毒核酸檢測(cè):采用熒光定量RT-PCR檢測(cè)寨卡病毒。
  2.病毒抗原檢測(cè):采用免疫組化法檢測(cè)寨卡病毒抗原。
  3.病毒分離培養(yǎng):可將標(biāo)本接種于蚊源細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等方法進(jìn)行分離培養(yǎng),也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進(jìn)行病毒分離。
 
  PCR檢測(cè)試劑盒DNA復(fù)制用三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法是:
  1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
  2、退火:退火也叫復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個(gè)溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段,通過(guò)引物找到模板DNA的相應(yīng)位置,也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn);
  3、延伸:DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸,可構(gòu)成DNA)為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。

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