ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析
1.準(zhǔn)備一個培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）。

2.在37℃水浴中或ATCC細(xì)胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴(yán)格無菌條件下進行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些ATCC細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。
某些細(xì)胞系，如雜交瘤細(xì)胞，需要幾天的時間才能從凍存狀態(tài)*復(fù)蘇。某些雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)的*天活力較差，并會產(chǎn)生細(xì)胞碎片。在此之后，細(xì)胞就會開始復(fù)蘇，并進入指數(shù)增長。

某些ATCC細(xì)胞，是在培養(yǎng)瓶中以活細(xì)胞的形式運輸?shù)?。這些培養(yǎng)瓶中會接種細(xì)胞，孵育并保證細(xì)胞能生長，然后補充滿培養(yǎng)基后再運輸。
在收到培養(yǎng)瓶后，目視檢查培養(yǎng)基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變?yōu)辄S色或紫色），渾濁度，或有無顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)基中是否有微生物污染以及ATCC細(xì)胞的形態(tài)。