轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的準(zhǔn)備工作

一、轉(zhuǎn)化細(xì)胞準(zhǔn)備工作
 
準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。
 
1、清潔、消毒、液體
 
直接接觸細(xì)胞的用品要超凈處理——無(wú)非必須分子
 
直接接觸細(xì)胞的用品要*消除微生物
 
超凈和消毒過(guò)的樣品要密閉保存，標(biāo)記消毒時(shí)間
 
實(shí)驗(yàn)室保持潔凈，隨時(shí)消毒
 
盡量采用商品化一次性用品
 
操作者也要清潔和消毒
 
緩沖液要符合生理滲透壓（280～310 mOsm）和pH（7.2～ 7.4 ）
 
2、玻璃器皿超凈
 
去污劑煮沸30min（超聲波震蕩30min） 溫水刷洗 流水沖洗 酸性洗滌液浸泡 流水沖洗 蒸餾水沖洗 純水漂洗 在潔凈溫箱中烤干 密封消毒
 
3、消毒
 
干熱——玻璃器皿  160℃，120min
 
濕熱（高壓，120 ℃ ）  10~20磅，20~30min
 
紫外線——空氣
 
消毒劑——場(chǎng)面
 
微孔過(guò)濾——液體  0.22um、0.45um
 
二、轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)的條件和培養(yǎng)基要求：
 
選擇合適的培養(yǎng)基，保證全過(guò)程的無(wú)菌
 
細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需要：氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)離子、蛋白質(zhì)、促生長(zhǎng)因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情況下還需加入10％的胎?；蛐律Ｑ濉?br />相關(guān)產(chǎn)品：人褪黑素(MT)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Melatonin，MT ELISA Kit                
人血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Thromboxane B2，TX-B2 ELISA Kit                
人皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Corticosterone，CORT ELISA Kit                
人前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Prostaglandin E2，PG-E2 ELISA Kit                

培養(yǎng)基的制備：a..濃度要準(zhǔn)－滲透壓、b. 酸堿度要適宜－酸度計(jì)
 
轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生存環(huán)境：a.. 溫度、b.氣相、 c.滲透壓--290mmol/L