細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的預(yù)防策略與控制技術(shù)

支原體污染確實(shí)是細(xì)胞培養(yǎng)中一個(gè)非常頭疼的問(wèn)題，因?yàn)樗ǔ](méi)有明顯的外觀變化，但會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的各項(xiàng)生理功能，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)。

預(yù)防支原體污染的專業(yè)建議

預(yù)防遠(yuǎn)比處理更重要，核心在于建立一套嚴(yán)格的無(wú)菌操作規(guī)范和環(huán)境監(jiān)控體系。

1.源頭控制：

- 從信譽(yù)良好的機(jī)構(gòu)購(gòu)買(mǎi)經(jīng)過(guò)支原體檢測(cè)認(rèn)證的細(xì)胞系。

- 新引入的細(xì)胞必須隔離培養(yǎng)，并進(jìn)行支原體檢測(cè)，確認(rèn)陰性后才能與其他細(xì)胞共用。

- 定期對(duì)工作細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行支原體篩查。

2.操作規(guī)范：

- 在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行所有操作，確保臺(tái)面無(wú)菌。

- 嚴(yán)格執(zhí)行個(gè)人防護(hù)，如佩戴一次性手套和口罩。

- 定期清潔和消毒培養(yǎng)箱、液氮罐、移液器等設(shè)備。

- 避免不同細(xì)胞系的交叉使用，如更換吸頭和培養(yǎng)基。

3.試劑管理：

- 使用無(wú)菌的培養(yǎng)基、血清和添加劑。

- 定期檢查試劑是否有渾濁、變色等異常。

常用的支原體檢測(cè)與清除試劑

1.檢測(cè)試劑：

- PCR檢測(cè)試劑盒：這是目前常用、靈敏的方法，能快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出支原體DNA。

- 熒光染色法：利用DAPI等染料使支原體DNA著色，在熒光顯微鏡下可觀察到。

2.清除試劑：

- 抗生素類：如支原體去除試劑（Mycoplasma Removal Agent, MRA），通常含有特定抗生素組合，能有效殺滅支原體。

- 抗支原體血清：通過(guò)免疫動(dòng)物獲得，可特異性中和并清除支原體。

- 其他化學(xué)試劑：如某些消毒劑可用于環(huán)境和設(shè)備的消毒，但不能直接用于細(xì)胞培養(yǎng)體系。

為了方便你在實(shí)際操作中對(duì)照檢查，這里幫您整理了一份細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染防控清單，這樣能幫你把這些要點(diǎn)落實(shí)到日常工作中。

細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染防控清單

一、源頭控制與細(xì)胞管理

- 新細(xì)胞引入：新購(gòu)買(mǎi)或饋贈(zèng)的細(xì)胞，必須先在隔離培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

- 入庫(kù)檢測(cè)：所有細(xì)胞在建立工作細(xì)胞庫(kù)前，必須進(jìn)行支原體檢測(cè)。

- 定期篩查：每3-6個(gè)月，對(duì)所有正在培養(yǎng)的細(xì)胞系進(jìn)行一次支原體檢測(cè)。

二、無(wú)菌操作規(guī)范

- 個(gè)人防護(hù)：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，更換干凈的實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套和口罩。

- 臺(tái)面準(zhǔn)備：用75%乙醇擦拭超凈工作臺(tái)面、移液器和將要使用的試劑瓶外壁。

- 避免交叉：不同細(xì)胞系操作時(shí)，更換吸頭、移液管和廢液缸，避免交叉污染。

- 及時(shí)清理：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即清理臺(tái)面，用75%乙醇再次消毒。

三、試劑與耗材管理

- 無(wú)菌驗(yàn)證：只使用有明確無(wú)菌證明的培養(yǎng)基、血清和添加劑。

- 避免污染：試劑分裝時(shí)，使用無(wú)菌操作，避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間室溫放置。

- 定期檢查：檢查培養(yǎng)基是否渾濁、變色，血清是否有沉淀或異常。

四、環(huán)境與設(shè)備維護(hù)

- 培養(yǎng)箱清潔：每周用75%乙醇擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁和隔板，定期更換水盤(pán)。

- 超凈臺(tái)維護(hù)：定期清潔和更換超凈臺(tái)的HEPA過(guò)濾器。

- 儀器消毒：液氮罐、離心機(jī)等設(shè)備，按規(guī)定進(jìn)行定期清潔和消毒。

五、污染應(yīng)急處理

- 隔離與確認(rèn)：一旦懷疑污染，立即將可疑細(xì)胞隔離，并進(jìn)行支原體檢測(cè)。

- 環(huán)境消毒：如確認(rèn)污染，需對(duì)培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)等進(jìn)行消毒。

- 細(xì)胞處理：輕度污染可嘗試使用支原體清除試劑；嚴(yán)重污染建議丟棄，避免擴(kuò)散。