高效液相色譜儀以下幾個(gè)錯(cuò)誤的操作方式要避免

錯(cuò)誤 1：直接使用未經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相。部分操作人員為節(jié)省時(shí)間，將未經(jīng)過(guò) 0.22μm（或 0.45μm）濾膜過(guò)濾的甲醇、乙腈或緩沖液直接倒入溶劑瓶。流動(dòng)相中可能含有的微小顆粒（如試劑雜質(zhì)、塵埃）會(huì)隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱，堵塞柱內(nèi)填料孔隙，導(dǎo)致柱壓驟升、柱效快速下降，甚至造成色譜柱損壞；同時(shí)，顆粒還可能污染進(jìn)樣閥與檢測(cè)器流通池，影響儀器正常運(yùn)行。正確做法是：所有流動(dòng)相（包括水相、有機(jī)相、緩沖液）均需通過(guò)對(duì)應(yīng)孔徑的濾膜過(guò)濾，且水相、有機(jī)相需使用不同濾膜（水相用親水膜，有機(jī)相用疏水膜），避免濾膜溶解污染流動(dòng)相。

錯(cuò)誤 2：流動(dòng)相未脫氣。若直接使用未脫氣的流動(dòng)相，其中溶解的氧氣、氮?dú)獾葰怏w在色譜柱中因壓力變化會(huì)釋放氣泡，氣泡進(jìn)入檢測(cè)器后會(huì)導(dǎo)致基線劇烈波動(dòng)、出現(xiàn)尖銳雜峰，嚴(yán)重時(shí)會(huì)中斷流動(dòng)相輸送，造成分析數(shù)據(jù)失真；此外，溶解氧還可能與流動(dòng)相中的有機(jī)相（如甲醇）或樣品發(fā)生反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。正確做法是：采用超聲脫氣（一般超聲 15-20 分鐘）、在線脫氣或真空脫氣等方式，尤其在使用緩沖液或混合流動(dòng)相時(shí)，需延長(zhǎng)脫氣時(shí)間，避免氣泡殘留。

錯(cuò)誤 1：樣品未過(guò)濾或過(guò)濾不規(guī)范。若將含有懸浮顆粒、絮狀物的樣品直接進(jìn)樣，顆粒會(huì)堵塞進(jìn)樣針、進(jìn)樣閥，甚至隨樣品進(jìn)入色譜柱，與流動(dòng)相中的雜質(zhì)共同加劇柱污染；同時(shí)，顆粒在檢測(cè)器中會(huì)產(chǎn)生假信號(hào)，導(dǎo)致色譜峰形拖尾、基線漂移，無(wú)法準(zhǔn)確判斷樣品組分。正確做法是：使用 0.22μm（與流動(dòng)相濾膜孔徑一致）的針式濾頭對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾時(shí)需棄去初始幾滴濾液，避免濾頭污染樣品；對(duì)于粘稠度較高的樣品，需先進(jìn)行稀釋或離心處理，再進(jìn)行過(guò)濾。

錯(cuò)誤 2：樣品溶劑與流動(dòng)相不兼容。部分操作人員為方便，使用與流動(dòng)相極性差異過(guò)大的溶劑溶解樣品（如用純甲醇溶解需用磷酸鹽緩沖液 - 乙腈作為流動(dòng)相的樣品），會(huì)導(dǎo)致樣品進(jìn)入色譜柱后因溶劑與流動(dòng)相混合不均，出現(xiàn) “溶劑效應(yīng)"—— 表現(xiàn)為色譜峰分裂、峰形不對(duì)稱(chēng)、保留時(shí)間漂移，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響組分分離度，無(wú)法準(zhǔn)確定量。正確做法是：選擇與流動(dòng)相初始比例（或極性相近）的溶劑溶解樣品，若樣品在流動(dòng)相中溶解度較低，可適當(dāng)提高有機(jī)相比例，但需確保溶劑與流動(dòng)相混合后無(wú)分層、無(wú)沉淀。

錯(cuò)誤 1：開(kāi)機(jī)后直接升壓，未進(jìn)行系統(tǒng)排氣。開(kāi)機(jī)后若未先開(kāi)啟泵進(jìn)行低流速（如 0.2-0.5mL/min）排氣，直接將流速升至分析流速并升壓，會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)內(nèi)殘留的氣泡被壓縮在管路或色譜柱中，形成 “氣塞"，造成柱壓異常升高；同時(shí)，突然升壓會(huì)對(duì)色譜柱填料產(chǎn)生沖擊，導(dǎo)致填料顆粒塌陷，縮短色譜柱使用壽命。正確做法是：開(kāi)機(jī)后先將泵流速調(diào)至 0.5mL/min，打開(kāi)排液閥（或斷開(kāi)色譜柱入口端），待流出液無(wú)氣泡后，關(guān)閉排液閥（或連接色譜柱），再逐步升高流速至分析條件，避免流速驟升驟降。

錯(cuò)誤 2：分析結(jié)束后未及時(shí)沖洗系統(tǒng)與色譜柱。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后若直接關(guān)機(jī)，流動(dòng)相中殘留的緩沖液（如磷酸鹽、醋酸鹽）會(huì)在色譜柱內(nèi)干燥結(jié)晶，堵塞填料孔隙；同時(shí)，緩沖液與有機(jī)相混合后若長(zhǎng)時(shí)間停留，可能產(chǎn)生沉淀，污染進(jìn)樣閥與檢測(cè)器流通池；對(duì)于反相色譜柱，若未用純有機(jī)相（如甲醇、乙腈）封存，柱內(nèi)殘留的水相會(huì)導(dǎo)致填料水解，降低柱效。正確做法是：分析結(jié)束后，先使用不含緩沖鹽的流動(dòng)相（如甲醇 - 水）沖洗系統(tǒng) 20-30 分鐘，再用純有機(jī)相沖洗色譜柱 30 分鐘以上（確保柱內(nèi)無(wú)緩沖鹽殘留），最后關(guān)閉泵與檢測(cè)器，待柱溫降至室溫后關(guān)機(jī)。

錯(cuò)誤 3：檢測(cè)器操作不當(dāng)，影響檢測(cè)精度。常見(jiàn)錯(cuò)誤包括：紫外檢測(cè)器未進(jìn)行基線校正即開(kāi)始分析，導(dǎo)致基線漂移影響峰面積積分；熒光檢測(cè)器未開(kāi)啟氙燈預(yù)熱，直接進(jìn)行檢測(cè)，導(dǎo)致光源強(qiáng)度不穩(wěn)定，出現(xiàn)熒光信號(hào)波動(dòng)；檢測(cè)器流通池污染后未及時(shí)清洗，殘留的樣品或流動(dòng)相在流通池內(nèi)吸附，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。正確做法是：開(kāi)機(jī)后需對(duì)檢測(cè)器進(jìn)行基線校正（紫外檢測(cè)器需預(yù)熱 30 分鐘以上），熒光檢測(cè)器需提前開(kāi)啟氙燈預(yù)熱 1 小時(shí)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需用合適的溶劑（如甲醇、乙腈）沖洗流通池，若流通池污染嚴(yán)重，可使用稀硝酸（針對(duì)金屬離子污染）或超聲清洗（需拆卸流通池，按儀器說(shuō)明書(shū)操作）。

錯(cuò)誤 1：長(zhǎng)期不更換進(jìn)樣針與密封圈。進(jìn)樣針長(zhǎng)期使用后，針尖易磨損或變形，導(dǎo)致進(jìn)樣體積不準(zhǔn)確，出現(xiàn)定量重復(fù)性差；進(jìn)樣閥密封圈長(zhǎng)期受流動(dòng)相腐蝕、樣品摩擦，會(huì)出現(xiàn)密封不嚴(yán)，導(dǎo)致流動(dòng)相泄漏、進(jìn)樣交叉污染（前一樣品殘留影響后一樣品分析）。正確做法是：每使用 500-1000 次進(jìn)樣針后，檢查針尖狀態(tài)，若出現(xiàn)磨損及時(shí)更換；進(jìn)樣閥密封圈每使用 3-6 個(gè)月（或出現(xiàn)泄漏時(shí)）更換，更換時(shí)需注意密封圈型號(hào)與安裝方向，避免安裝錯(cuò)誤導(dǎo)致密封失效。

錯(cuò)誤 2：色譜柱儲(chǔ)存與使用不當(dāng)。將不同類(lèi)型的色譜柱（如反相柱、正相柱）混合儲(chǔ)存，未標(biāo)注使用記錄，易導(dǎo)致色譜柱誤用（如用反相柱分析正相樣品）；色譜柱長(zhǎng)期不用時(shí)，未按要求用專(zhuān)用溶劑封存（如正相柱用正己烷 - 異丙醇封存），導(dǎo)致柱內(nèi)填料干裂或受潮；使用時(shí)隨意改變色譜柱溫度范圍（如超過(guò)色譜柱標(biāo)注的最高溫度），導(dǎo)致填料性能退化，柱效下降。正確做法是：色譜柱儲(chǔ)存時(shí)需標(biāo)注型號(hào)、使用時(shí)間、上次分析樣品類(lèi)型，按極性或類(lèi)型分類(lèi)存放；長(zhǎng)期不用時(shí)，用對(duì)應(yīng)的封存溶劑沖洗后密封兩端，存放于陰涼干燥處；使用時(shí)嚴(yán)格遵守色譜柱的溫度、pH 范圍要求，避免超范圍使用。