Poly (ADP-Ribose) ELISA試劑盒化驗原理&文獻(xiàn)參考

聚ADP-核糖基化（Poly ADP-ribosylation，標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)）是真核細(xì)胞中的一種翻譯后修飾，可調(diào)節(jié)修飾后蛋白質(zhì)的活性，并將其與其他蛋白質(zhì)結(jié)合他們與其他人的互動。這種修飾是由聚ADP核糖聚合酶介導(dǎo)的（PARPs）和ADP核糖基轉(zhuǎn)移酶2（ART2），其使用煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）作為基底ADP-核糖基化可被PAR降解酶如聚（ADP-核糖）逆轉(zhuǎn)糖水解酶（PARG）和ADP核糖水解酶3（ARH3）（圖1）。

聚ADP核糖基化參與不同的生物學(xué)功能，如致癌、分化以及細(xì)胞死亡。ADP核糖基化活性的失調(diào)與諸如癌癥、病毒感染和神經(jīng)變性等疾病。ADPribosation受研究的作用之一是產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)鏈以應(yīng)對DNA損傷。使用這些標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)鏈募集修復(fù)蛋白和染色質(zhì)重塑因子。因此，DNA修復(fù)過程增強(qiáng)。這可能是腫瘤逃避細(xì)胞凋亡的一種機(jī)制。最近PARP家族成員在治療某些癌癥方面表現(xiàn)出了希望，有三種藥物可在美國和歐洲買到，主要用于治療BRCA突變卵巢癌癥

圖1：聚ADP核糖基化反應(yīng)。PARP酶水解NAD+并將ADPribose基團(tuán)（ADPr）轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)受體上。幾個相互連接的ADPr單元生成一個長帶負(fù)電的聚合物。這些聚合物被PARG和ARH3降解。

艾美捷Cell Biolabs Poly (ADP-Ribose) ELISA試劑盒#XDN-5114是一種為快速檢測而開發(fā)的酶免疫測定試劑盒以及細(xì)胞或組織樣本中標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)水平的定量。通過比較未知樣品的吸光度和已知標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度，確定未知樣品中標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)的數(shù)量。該套件有一個每個試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行多達(dá)96次測定，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣本。

Poly (ADP-Ribose) ELISA試劑盒化驗原理：

Poly（ADP-核糖）ELISA試劑盒是一種夾心ELISA試劑，用于定量測定標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)。首先將樣品或標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品添加到單克隆抗PAR抗體涂層微孔板中。在短暫培養(yǎng)后，添加抗PAR多克隆檢測抗體，然后添加HRP結(jié)合的第二抗體。添加基質(zhì)后，發(fā)生比色反應(yīng)用比色板讀數(shù)器測量。未知樣品中的標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)含量由以下公式確定將此吸光度與標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)聚合物標(biāo)準(zhǔn)曲線中的吸光度進(jìn)行比較。

Poly (ADP-Ribose) ELISA試劑盒組分：

箱子1（在室溫下裝運）

1.96孔蛋白質(zhì)結(jié)合板（零件號231001）：一個帶孔96孔板

2.抗聚（ADP核糖）涂層抗體（零件號51146C）：一個20µL小瓶

3.抗聚ADP核糖檢測抗體（零件號51142C）：一個15µL小瓶

4.第二抗體，HRP綴合物（1000X）（零件號51143C）：一個15µL小瓶

5.含量測定稀釋劑（零件號310804）：一瓶50 mL

6.10X洗滌緩沖液（零件號310806）：一瓶100毫升

7.基質(zhì)溶液（零件號310807）：一個12 mL琥珀色瓶子

8.停止溶液（零件號310808）：一瓶12 mL

9.100X PARP抑制劑（零件號51145C）：一瓶3 mL琥珀色3-氨基苯甲酰胺（3-AB）

在二甲基亞砜中為100 mg/mL（735 mM）

箱子2（藍(lán)色冰袋裝運）

1.聚（ADP核糖）標(biāo)準(zhǔn)品（零件號51144D）：一個10µL小瓶，2.5µM。

Poly (ADP-Ribose) ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Miwa, M. and Masutani, M. (2017). PolyADP-ribosylation and cancer. Cancer Sci. 98(10):1528-

35.

2. Lüscher, B. et al. (2018). ADP-Ribosylation, a Multifaceted Posttranslational Modification

Involved in the Control of Cell Physiology in Health and Disease. Chem Rev. 118(3):1092-1136.

3. Martin-Hernandez, K. et al. (2017). Expanding functions of ADP-ribosylation in the maintenance

of genome integrity. Semin Cell Dev Biol. 63:92-101.