內(nèi)切酶EcoRI, 無動物源性使用方法

內(nèi)切酶EcoRI, 無動物源性背景：

經(jīng)過基因工程改造的EcoRI，ADCF，能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。它可用于鑒定質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物和基因組。EcoRI，ADCF具有以下特點：在5到15分鐘內(nèi)快速消化，極-好的酶活性冗余，易于處理底物過量或具有挑戰(zhàn)性的模板消化。這種酶不含動物來源的成分

艾美捷內(nèi)切酶EcoRI, 無動物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

內(nèi)切酶EcoRI, 無動物源性組成：

單位定義：

一個單位定義為在37°C、50µL推薦反應(yīng)緩沖液中1小時內(nèi)消化1µgλDNA所需的EcoRI量

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制

凈化

SDS-PAGE檢測結(jié)果大于95%。

核酸內(nèi)切酶殘基

將20U的EcoRI與超螺旋質(zhì)粒DNA在37°C下孵育4小時，DNA電泳中未檢測到質(zhì)粒的變化。

藍/白篩選試驗：

用1μl EcoRI消化含有locZa基因的合適載體。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細胞中。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功門控的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產(chǎn)生藍色菌落，而中斷的基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。ADCF限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

DNA酶殘基

將20U的EcoRI與雙鏈DNA在37°C下孵育16h，DNA電泳未檢測到DNA的變化。

RNase殘基

將20U的EcoRI與RNA在37℃下孵育1小時，電泳中未檢測到RNA降解

結(jié)扎和清算

在最佳反應(yīng)溫度下用20U的EcoRI消化后，DNA片段可以在22°C下與T4 DNA連接酶（Fast）連接。在這些連接的片段中，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，大多數(shù)片段可以用EcoRl重新切割。

宿主DNA殘基：

通過對大腸桿菌16S rDNA特異性的TaqMan-qPCR檢測酶溶液中的核酸殘基，檢測到少于10pg的大腸桿菌基因組殘基。

宿主蛋白殘留：

通過ELISA測定大腸桿菌宿主蛋白低于50ppm。

無菌：

未檢測到大腸桿菌。

內(nèi)毒素殘留量：

<10 EU/mg