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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>技術(shù)文章>>[干冰]K63連接特異性UbiTest-瓊脂糖管洗脫試劑盒,清楚表明蛋白泛素化
UbiTest試劑盒用于確定目標(biāo)蛋白是否被多泛素化。這一強(qiáng)大的平臺改進(jìn)了研究蛋白質(zhì)泛素化常用的方法:免疫沉淀和Western blot分析。然而,在免疫印跡步驟中,底物抗體常常與底物的多泛素化形式相互作用不同。這是由于表位遮蔽、親和力降低或選擇性變化所導(dǎo)致的。一種更明確的證明蛋白質(zhì)泛素化的方法是,在免疫印跡分析之前,將免疫沉淀與廣譜去泛素化酶(DUB)消化相結(jié)合。經(jīng)過DUB處理后,目標(biāo)蛋白(POI)的信號增加,這清楚地表明該蛋白已被泛素化,即使在未處理的樣本中沒有明顯的反應(yīng)性也是如此。為了避免由于POI免疫反應(yīng)性變化而可能產(chǎn)生的問題,UbiTest檢測利用TUBEs來下拉多泛素化蛋白。TUBEs(串聯(lián)泛素結(jié)合實(shí)體)是經(jīng)過工程改造的串聯(lián)泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域,其對四泛素的解離常數(shù)在納摩爾范圍內(nèi)。TUBE1已被證明能夠結(jié)合所有8種連接類型。
確定目標(biāo)蛋白上多泛素化的連接類型是具有挑戰(zhàn)性的。傳統(tǒng)方法要么通過質(zhì)譜(MS),要么使用連接特異性抗體進(jìn)行Western blot。LifeSensors開發(fā)了一種更明確的方法,通過在免疫印跡分析之前使用連接特異性DUB來證明蛋白質(zhì)的多泛素化連接類型。經(jīng)過K63特異性DUB處理后,未修飾POI對應(yīng)的條帶信號增加,清楚地表明該蛋白被K63多泛素化。
艾美捷[干冰]K63連接特異性UbiTest-瓊脂糖管洗脫試劑盒:
貨號:UM-0413-6300
分類:試管:泛素親和力矩陣,UbiTest
標(biāo)簽:試劑盒和平板,試管:泛素親和基質(zhì)
組成:
除了泛選擇性UbiTest瓊脂糖洗脫試劑盒的組分外,該試劑盒還包含:
K63連接特異性DUB:35 ug,10 uM
應(yīng)用:
從細(xì)胞和組織提取物中方便地一步下拉多泛素化蛋白
分離多泛素化蛋白用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究
確認(rèn)目標(biāo)蛋白的多泛素化及其連接類型
真正證明多泛素化——無需質(zhì)譜
方便比較處理樣本之間的多泛素化水平
方便對多個(gè)POI進(jìn)行篩選
無需底物純化
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