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細(xì)胞浸潤(rùn)生長(zhǎng)性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
閱讀:452 發(fā)布時(shí)間:2018-12-21實(shí)驗(yàn)方法原理
浸潤(rùn)性生長(zhǎng)是細(xì)胞浸入或穿透其它組織增殖生長(zhǎng)能力,浸潤(rùn)生長(zhǎng)性檢測(cè)是檢測(cè)癌性細(xì)胞的一項(xiàng)有意義的指標(biāo)。檢測(cè)方法需用其它正常組織和癌細(xì)胞共同培養(yǎng),觀察癌細(xì)胞向正常組織浸潤(rùn)生長(zhǎng)的情況。
實(shí)驗(yàn)材料 雞胚
試劑、試劑盒 Bacto瓊脂Eagle 緩沖液小牛血清福爾馬林Hanks液碘酒
儀器、耗材 玻璃圈CO2溫箱培養(yǎng)皿平皿蓋手術(shù)剪手術(shù)鉗離心機(jī)注射器燒杯
實(shí)驗(yàn)步驟
常用雞胚皮膚或心肌組織塊,作為被浸潤(rùn)生長(zhǎng)的對(duì)象;今以雞胚皮膚為例,培養(yǎng)過(guò)程如下
1. 程序
(1)雞胚浸出液制備
(2)瓊脂層制備
1 %Bacto瓊脂(用不含NaHCO3的Eagle緩沖液配)10 分
小牛血清 4 分
雞胚浸出液 4 分
(3)雞胚皮培養(yǎng)
無(wú)菌從10 天胚齡雞胚背部取皮,切成6~8 mm3小塊;每皿中置2~3 塊,貼在瓊脂層表面;
(4)取內(nèi)徑6 mm,厚2 mm的無(wú)菌小磁杯或玻璃圈(硅橡膠圈亦可),套在雞皮小塊上;
(5)共培養(yǎng)
向每個(gè)小磁圈中加入25~30 μl細(xì)胞懸液(含104 個(gè)細(xì)胞的2 倍培養(yǎng)液),蓋上平皿蓋,置37 ℃CO2溫箱中培養(yǎng);
(6)補(bǔ)液
次日再向每個(gè)環(huán)中補(bǔ)加2 倍培養(yǎng)液2.5 μl;
(7)切片觀察
第4 天挖取出雞皮塊,10 %福爾馬林固定,常規(guī)包埋、切片、染色、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞對(duì)雞胚皮膚浸潤(rùn)的情況。
2. 結(jié)果
如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi),說(shuō)明該細(xì)胞具有浸潤(rùn)生長(zhǎng)能力。
收起
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)避免細(xì)菌感染,如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi),說(shuō)明該細(xì)胞具有浸潤(rùn)生長(zhǎng)能力。
其他
雞胚浸出液內(nèi)含有生長(zhǎng)因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激細(xì)胞生長(zhǎng)作用,為早年培養(yǎng)使用的培養(yǎng)用液,現(xiàn)已被合成培養(yǎng)液所代替,但在某些研究中仍有一定應(yīng)用價(jià)值。