產(chǎn)品及特點(diǎn)

乙型肝炎病毒（HBV）共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）是乙肝病毒前基因組 RNA 復(fù)制的原始模板，雖含量較少，每個(gè)肝細(xì)胞內(nèi)只有約 5-50 個(gè)拷貝，但對(duì)乙肝病毒的復(fù)制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義，只有清除了 cccDNA，才能*消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)。因此 cccDNA 的檢測(cè)具有重要的臨床意義。本產(chǎn)品是基于常規(guī) PCR 技術(shù)的乙肝病毒cccDNA 快速檢測(cè)試劑盒。它具有下列特點(diǎn)：

• 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
• 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增乙肝炎病毒cccDNA。
• 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
• PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
• 本試劑盒足夠做 40μL 體系的PCR 50 次。
• 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成 份

編號(hào)

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL（紅蓋）

超純水

100935

1 mL（亮黃蓋）

乙型肝炎病毒cccDNA PCR

引物混合液

13-10000yw

100 μL（白蓋）

乙型肝炎病毒cccDNA PCR 陽性對(duì)照

（1×10E8 拷貝/μL）

13-10000pc

50 μL（黃蓋）

天凈沙核酸釋放劑(試用裝)

61202

20 次（1mL、綠蓋）

使用手冊(cè)

13-10000sc

1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其

他試劑。

自備試劑

樣品 DNA。

使用方法

一、樣品DNA 的制備

• 如果有N 個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽性對(duì)照的 100 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。
• 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的病毒 DNAout 或柱式病毒 DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 50 次免 DNA 提取的天凈沙 DNA 釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液

可以直接作為PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。

二、設(shè)置PCR 反應(yīng)（40 μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在PCR 時(shí)需要增加一個(gè)PCR 陽性對(duì)照和一個(gè)PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4 個(gè)反應(yīng)。在N+4 個(gè)PCR 管中分別加入下列成分：

成分 N+2 個(gè) PCR 陰性 PCR 陽性

樣品管 對(duì)照管 對(duì)照管

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL       20 μL 20 μL

乙肝炎病毒 cccDNA PCR

各 2 μL 2 μL 2 μL

引物混合液

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 陰性對(duì)照（超純水） - 18 μL -

PCR 陽性對(duì)照（乙肝炎病毒

cccDNA PCR 陽性對(duì)照的 - - 18 μL 100 倍稀釋液）

4. 按下表設(shè)置PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

• 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為  334bp。陽性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR

擴(kuò)增以排除PCR 抑制劑的感染。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

乙肝炎病毒cccDNA 可視化 LAMP 擴(kuò)增試劑盒