小鼠胰腺星狀細(xì)胞

小鼠胰腺星狀細(xì)胞采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD31/vWF免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1.產(chǎn)品名稱：小鼠胰腺星狀細(xì)胞
2.組織來(lái)源：胰腺組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠胰腺星狀細(xì)胞分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌生長(zhǎng)抑素，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A脂滴可以被油紅O染成紅色，陽(yáng)性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽(yáng)性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見(jiàn)明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開(kāi)始表達(dá)alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA，而不再表達(dá)Desmin，說(shuō)明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動(dòng)了激活過(guò)程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時(shí)，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。
本公司生產(chǎn)的采用膠原酶制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Desmin、alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM-F12、FBS、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-M016）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

三、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞可傳3-5代；建議您收到
細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽
和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培
養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待
細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml*培養(yǎng)基終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*
培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和
技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)
和我們，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)
題得到解決。
5. 只可用于科研。
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考