大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細(xì)胞

大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞 ST(豬細(xì)胞) FIP293 人胚胎細(xì)胞（Rabll基因修飾） 1ml/T75 EC-304? 人血管內(nèi)皮細(xì)胞 Calu-6 人退行性癌細(xì)胞 人原代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)采用消化法結(jié)合差速貼壁法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自三叉神經(jīng)組織；三叉神經(jīng)為最粗大的混合性腦神經(jīng)，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核，纖維組成三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內(nèi)側(cè)，最后進(jìn)入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)（半月節(jié)）內(nèi)，該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中除神經(jīng)元以外的另一大類細(xì)胞，也有突起，但無樹突和軸突之分，廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)。在哺乳類動(dòng)物中，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元的細(xì)胞數(shù)量比例約為10：1。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要有星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞（與前者合稱為大膠質(zhì)細(xì)胞）和小膠質(zhì)細(xì)胞等。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細(xì)胞屬于結(jié)締組織，其作用僅是連接和支持各種神經(jīng)成分，其實(shí)神經(jīng)膠質(zhì)還起著分配營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、參與修復(fù)和吞噬的作用，在形態(tài)、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織。星形膠質(zhì)前體細(xì)胞主要表達(dá)Vimentin，而成熟之后表達(dá)Vimentin和膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP），故GFAP被認(rèn)為是星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟的標(biāo)志物。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。