大鼠尾動脈內皮原代細胞

大鼠尾動脈內皮原代細胞

大鼠尾動脈內皮細胞分離自尾動脈組織；尾動脈是鼠尾的主要血管，尾部主要大血管分布表淺，尾側靜脈適于注射給藥，尾正中動脈適于動脈采血、練習顯微外科血管吻合技術等，實際應用相當普遍。許多動物模型也使用鼠尾。鼠尾部血管豐富，供血來源于薦中動脈和臀上動脈兩個動脈，形成尾椎節(jié)段性分布和縱向貫通分布相結合的特點，尾部淺層 3 套縱向動靜脈系統(tǒng)，鼠尾背側為不規(guī)則動靜脈鏈狀結構，深層血管與淺層血管雙層籠狀以每節(jié)脊椎為單位溝通，且呈動靜脈血管徑不匹配的特點。通過研究發(fā)現(xiàn)鼠尾存在兩套血源: 薦中動脈和臀上動脈。其在尾部依尾橫動脈形成溝通。尾橫動脈呈尾椎節(jié)段性分布，直接溝通尾正中動脈、尾深動脈和皮支。在尾部被橫斷后，可以保持損傷節(jié)段以上尾椎的動靜脈回流通路; 鼠尾存在動靜脈口徑明顯不規(guī)范的現(xiàn)象: 尾外側靜脈明顯大于伴隨的動脈，而正中動脈明顯大于伴隨的靜脈，形成供血主要來自腹面的尾正中動，回血主要依靠兩側的尾側靜脈，符合腹面動脈保護的安全性，同時利于血管散熱，尾橫動脈提供了不同血源體系的溝通渠道。參考文獻[王蕾，葉明霞.大鼠尾部血管的解剖結構與鼠尾的生理功能探討]。

產品名稱：大鼠尾動脈內皮細胞

組織來源：尾動脈

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠尾動脈內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的大鼠尾動脈內皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠尾動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

大鼠脂肪酸去飽和酶2(FADS2)試劑盒 ，英文名： FADS2 ELISA Kit

Mouse soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1 (sPECAM-1/sCD31) ELISA Kit 小鼠可溶性血小板內皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)試劑盒

MouseInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit 小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanhighmobilitygroupprotein17,HMG-17ELISAKit人高速泳動蛋白17

比色法定量試劑盒20次

ELISAKitALP大鼠堿性0酸酶

小鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai endomeial aibody (EMAb) ELISA Kit 大鼠抗子宮內膜抗體(EMAb)試劑盒

HumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit 樣轉錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCP試劑盒人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物活性線粒體分離試劑盒10次

Humanα1-microglobulin,α1-MGELISAKit人α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔子脫氫表雄酯(DHEA-S)試劑盒   96T/48T

兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒   96T/48T

兔子瘦素(LEP)試劑盒   96T/48T

兔子結合蛋白4(RBP-4)試劑盒   96T/48T

GAG-P24重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype C, strain 92BR025) Protein

Thioster-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原 0.5mgThioster-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原)

IL7R重組人 IL7RA / CD127 蛋白 Protein

ICAM5 Protein Human 重組人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (Fc 標簽)

HRG Protein Human 重組人 HPRG / HRG 蛋白

DSC2 Others Human 人 DSC2 / Desmocollin-2 人細胞裂解液   ARPE-19(人視網膜上皮細胞)     CA10 Others Human 人 CA10 / Carbonic anhydrase X 人細胞裂解液   NCI-H716(人結直腸腺癌細胞) 小鼠原代脈絡膜微血管內皮細胞 人原代附睪管上皮細胞

大鼠尾動脈內皮原代細胞CD177/NB1 peptide 嗜粒細胞抗原CD177抗原 0.5mgCD177/NB1 peptide 嗜粒細胞抗原CD177抗原

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 蛋白

NTRK3重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 Protein

CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

AK1重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。