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詳細介紹
人鞏膜成纖維原代細胞
人鞏膜成纖維細胞分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜，后方與視的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視穿出部附近厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復(fù)增厚(鞏膜厚度：后極部1mm，赤道部0.4～0.5mm，直肌附著處0.3mm)。其與角膜交界處，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結(jié)構(gòu)堅韌，有支持和保護眼內(nèi)組織的作用。成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | Human Scleral Fibroblast Cells | 組織來源 | 鞏膜組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7700 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人鞏膜成纖維細胞
組織來源：鞏膜組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
方法簡介
普諾賽實驗室分離的人鞏膜成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
普諾賽實驗室分離的人鞏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
CM-H010人小氣道上皮細胞培養(yǎng)基100mL | ENK(Human enkephalin) ELISA Kit 人腦啡肽 96T |
RRAS2： 畸胎瘤癌基因RAS相關(guān)病毒抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Avidin 兔抗親和素 規(guī)格 1mg |
Anti-DcR2/CD264 /FITC 熒光素標記抗誘捕受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Calpain 12： 鈣激活蛋白酶12抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BSEP/ABCB11 膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CRP/Biotin 化C-反應(yīng)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
食道癌相關(guān)基因抗體 Anti-ECG2 0.1ml | ADRM1： 粘附調(diào)節(jié)分子1抗體 0.2ml |
WM35, 人黑色素瘤細胞 | 人元細胞培養(yǎng)基 100mL |
NRK-49F細胞，大鼠腎成纖微細胞 RT4(膀胱癌細胞) 豹貓肺成纖維樣細胞;LCL3 | EFNA3 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His 標簽) |
人腦瘤細胞;SF767 | 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4B |
Marc145 猴胚胎腎上皮細胞 | CL-0040BT-474(人導(dǎo)管癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
Saos-2細胞，成骨肉瘤細胞 人鼻咽癌細胞,HNE1細胞 CL-0273ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2 | 人鞏膜成纖維原代細胞Calpain 12： 鈣激活蛋白酶12抗體 0.2ml |
大鼠星形膠質(zhì)細胞RA | RLE-6TN細胞，大鼠肺上皮Ⅱ型細胞 PC-3(人前列腺癌細胞) 大鼠肝細胞;BRL 3A |
HKC(人胚腎上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 | 人橫紋肌肉瘤細胞;A-204 |
人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞;CCD-1095Sk | Rabbit Anti-IgG/FITC FITC標記的兔抗豬IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh GYG2 糖原蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml | 人氣管平滑肌細胞cDNAHTSMC cDNA |
EEA1： 早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml | Anti-phospho-LKB1(Ser334) 0酸化絲/蘇蛋白激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
TGF- Alpha(Mouse transforming growth factor Alpha) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子αMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | WM35, 人黑色素瘤細胞 |
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