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詳細(xì)介紹
人關(guān)節(jié)韌帶成纖維原代細(xì)胞
人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)韌帶組織；韌帶是纖維結(jié)締組織，將各個(gè)骨頭在關(guān)節(jié)處連接起來，并在關(guān)節(jié)活動(dòng)時(shí)加固關(guān)節(jié)穩(wěn)定關(guān)節(jié)。其中顳下頜關(guān)節(jié)、踝關(guān) 節(jié)、膝關(guān)節(jié)韌帶組織研究較多，顳下頜關(guān)節(jié)兩側(cè)各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關(guān)節(jié)周圍韌帶根據(jù)其解剖位置可以分成3組，外側(cè)韌帶 ，內(nèi)側(cè)三角韌帶，脛腓聯(lián)合韌帶。膝關(guān)節(jié)的韌帶有囊外韌帶和囊內(nèi)韌帶,其共同作用為加強(qiáng)關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關(guān)節(jié)囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續(xù),向下附著于脛骨粗隆，兩側(cè)有側(cè)副韌帶加強(qiáng)；囊內(nèi)韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側(cè)髁的內(nèi)側(cè)面 ，防止脛骨過度前移;后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內(nèi)側(cè)髁的外側(cè)面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關(guān)節(jié)內(nèi)尚有膝橫韌帶。任何關(guān)節(jié)韌帶均可由于 外傷而發(fā)生損傷，但影響較大又較常見的是膝關(guān)節(jié)韌帶損傷和踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。膝關(guān)節(jié)韌帶損傷，常見者為膝關(guān)節(jié)側(cè)副韌帶損傷。多因膝關(guān)節(jié)微屈時(shí)，突然受到 內(nèi)翻或外翻的沖擊力所致。踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。多因行走或跑跳時(shí)誤入不平之處所致。以外側(cè)損傷多見。韌帶是致密纖維結(jié)締組織，主要特點(diǎn)是細(xì)胞、基質(zhì)成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強(qiáng)的保護(hù)和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細(xì)胞。人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞對研究關(guān)節(jié)韌帶損傷有重要意義。
英文名稱 | Human Articular Ligament Fibroblast Cells | 組織來源 | 關(guān)節(jié)韌帶 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8294 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞
組織來源：關(guān)節(jié)韌帶
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
PANC-1細(xì)胞，胰腺癌細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞系,SUNE-1亞株6-10B細(xì)胞 CL-0339G-401(人腎癌Wilms細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | EMA IgA(Mouse anti-Endomysial Antibody IgA) ELISA KIT 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA 96T |
RAIDD： CASP2凋亡相關(guān)蛋白抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh RAB8B ras癌基因家族RAB8B抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HBV/pre S1/S2 protein /FITC 熒光素標(biāo)記抗乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CREB3L3： 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BSA/Bovine Serum Albumin 血清白蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CRP/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
外胚層發(fā)育不良抗體 Anti-ED-1 0.1ml | phospho-AMPK alpha 2 (Ser345)： 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶α2抗體 0.1ml |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr | 雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7 |
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A4 酶(含10mL 酶解緩沖液) 1mL | C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 Mouse |
CCD-18Co 正常人結(jié)腸組織細(xì)胞 | NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9401 | CL-0044C2C12(小鼠成肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
CL-0062CHO-K1(倉鼠卵巢細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2 | 人關(guān)節(jié)韌帶成纖維原代細(xì)胞CREB3L3： 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體 0.2ml |
大鼠雪旺細(xì)胞;RSC96 | A172細(xì)胞，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 肝細(xì)胞癌,HepG2細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205 |
CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MPC-11(小鼠漿細(xì)胞瘤) 5×106cells/瓶×2 |
人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA | Rabbit Anti-IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GUSB/beta glucuronidase β葡萄糖醛酸苷酶抗體 規(guī)格 0.2ml | 人氣管平滑肌細(xì)胞RNAHTSMC miRNA5 μg |
EMX2： 空通氣孔樣蛋白2抗體 0.2ml | Anti-Phospho-LKB1(Thr189) 0酸化絲/蘇蛋白激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
PAP(Mouse Prostatic Acid Phosphatase) ELISA Kit 小鼠前列腺酸性0酸酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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