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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人皮膚肥大采用膠原酶-混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人皮膚肥大經(jīng)MCG-35免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人皮膚肥大原代細胞 | 組織來源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Human Skin Mast Cells | 貨號 | YS-01X7355 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人皮膚肥大細胞分離自皮膚組織；皮膚肥大細胞廣泛分布于皮膚微血管周圍，分泌多種細胞因子，參與免疫調(diào)節(jié)（T細胞、B細胞、APC細胞活化）。皮膚肥大細胞表達MHC分子、B7分子，具有APC功能。表達大量的IgE-Fc受體，釋放過敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能，和血液的嗜堿粒細胞同樣，具有強嗜堿性顆粒的組織細胞。存在于血液中的這類顆粒，含有肝素、組織胺、5-羥色胺，由細胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì)，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應（炎癥）。由于在肥大細胞上結合的IgE抗體和抗原的接觸，使細胞多陷于崩壞。肥大細胞呈圓形或卵圓形，細胞核小，呈圓形或橢圓形，染色淺，位于細胞中央。細胞常成堆或單個分布于血管附近。細胞呈圓形或卵圓形，細胞質(zhì)中充滿大小一致、染成藍紫色的顆粒，均勻分布在核周圍。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細胞 非洲綠猴腎，BS-C-1細胞 hFOB 1.19(SV40 轉(zhuǎn)染成骨細胞) | Hyp(Mouse hydroxyproline) ELISA KIT 小鼠羥脯酸 96T |
RNF111： 環(huán)指蛋白111抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh RAB4 癌基因RAS相關蛋白Rab4A抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCN4/FITC 熒光素標記環(huán)化核苷酸調(diào)控陽離子通道蛋白亞型4IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C9ORF43： 9號染色體開放閱讀框43抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRN4/POU3F4 腦轉(zhuǎn)錄因子4蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CTBP1/FITC 熒光素標記C端結合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
酪蛋白激酶受體A2抗體 Anti-EphA2 R 0.1ml | phospho-alpha Adducin (Thr445)： 0酸化內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml |
人低侵襲性脈絡膜黑色素素瘤細胞;OCM-1A | HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞 |
AAV-293人胚腎細胞 Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS | TNF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋白 |
表皮黑色素細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人上皮細胞;Ca Ski |
CL-0266LS 180(人結腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0063CNE(人鼻咽癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
人星形膠質(zhì)細胞 人肺癌細胞，NCI-H1869[H1869]細胞 YAC-1(淋巴瘤細胞) | 人皮膚肥大原代細胞C9ORF43： 9號染色體開放閱讀框43抗體 0.2ml |
大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 801-D細胞，人巨細胞性肺癌細胞 轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控，含EGFP基因的CHO細胞,CHO-AA8細胞 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)基100mL |
人食道平滑肌細胞 (HESMC)( 5×105 ) RN-s, 大鼠紋狀體元 Rattus | 牦牛皮膚細胞;BMU-S1 |
人正常肺上皮細胞;BEAS-2B | IgM/Cy5 Cy5標記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GTF2B 通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺成纖維細胞HPrF |
Epsin2B： Epsin2B蛋白抗體 0.2ml | Anti-LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人低侵襲性脈絡膜黑色素素瘤細胞;OCM-1A |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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