化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人氣管平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 氣管 |
英文名稱 | Human Tracheal Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X7063 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人氣管平滑肌細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。氣管平滑肌細(xì)胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
胰島素鐵硒傳遞蛋白 100xITS | Anti-TSARG7 發(fā)生相關(guān)的新基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Human Elastase ELISA Kit 人彈 96T | Anti-Phospho-MYPT1 (Ser507)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化肌球蛋酸酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIMP-4 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 規(guī)格 0.1ml | MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HOXA9： 同源盒蛋白HOXA9抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC102B 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體 規(guī)格 0.2ml |
Fas Ligand： FasL抗體 0.1ml | MIF ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | A875(人黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 |
人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562 | CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FCAR Others Human 人 FCAR / CD89 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HTEpC Pellet 人類氣管上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人骨骼肌細(xì)胞cDNAHSkMC cDNA |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1 | 人氣管平滑肌原代細(xì)胞MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HIMEC)( 5×105 ) RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 Rattus | 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | HL-60/Ad細(xì)胞，人白血病阿耐藥株 小鼠單核巨噬細(xì)胞,J774A.1細(xì)胞 尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基UCM |
TEK Others Cynomolgus 食蟹猴 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-PSCA /FITC 熒光素標(biāo)記抗前列腺干細(xì)胞抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Oncomodulin： 癌調(diào)蛋白/癌鈣蛋白抗體 0.2ml | U-2 OS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T6-Swiss albino |
Sphingomyelin Synthase 2： 鞘0脂合成酶2抗體 0.2ml | CASC5： 易感性候選基因5抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)