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詳細(xì)介紹
人氣管上皮原代細(xì)胞
人氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
英文名稱 | Human Tracheal Epithelial Cells | 組織來源 | 氣管 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7035 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人氣管上皮細(xì)胞
組織來源：氣管
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管上皮采用蛋白酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
HepG2.2.15細(xì)胞，表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞 小鼠胃癌細(xì)胞,MFC細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | ASB17： 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族17抗體 0.2ml |
Anti-HLA E 人類白細(xì)胞抗原E抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCG1 三0酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser552) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化β 連環(huán)素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFABP 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
phospho-AR/androgen receptor( p-Ser580)peptide 雄激素受體(多肽) 0.5mg | HCV-NS1： 丙型肝炎病毒-NS1抗體 0.1ml |
IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM150A FAM150A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | C57BL/6小鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells |
BE(2)C細(xì)胞，人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 乙型溶血性鏈球菌 人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1 | Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
Lewis瘤 肺癌 | GREM1 Protein Mouse 重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-SH | Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
JAR人胎盤絨毛癌細(xì)胞 Human placeal villous carcinoma cells JAR DMEM+10%FBS | 人氣管上皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFABP 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Ierleukin-9 蛋白 (His 標(biāo)簽) | PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
LL-PK1細(xì)胞，豬腎細(xì)胞 人卵巢癌細(xì)胞,A2780細(xì)胞 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-裂解物HEK-a L | 人細(xì)胞HN |
II型肺泡上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | Rhesus antibody Rh IgG whole serum 兔抗長爪沙鼠IgG抗血清 規(guī)格 1ml |
8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 小鼠8異前列腺素 96T | CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
CPT1A peptide 肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | DHT(Human Dihydrotestosterone) ELISA Kit 人雙氫睪酮Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Msx2： 同源盒基因Msx2抗體 0.2ml | MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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