人神經(jīng)少突膠質(zhì)原代細(xì)胞

人神經(jīng)少突膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代角膜基質(zhì)細(xì)胞 食管鱗癌 英文名稱： KYSE150 FDC-P1 小鼠骨髓細(xì)胞 1ml/T75 Ca Ski, 人細(xì)胞 MRC-5 人胚肺細(xì)胞 小鼠原代浦肯野細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人少突膠質(zhì)采用消化、混合細(xì)胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人少突膠質(zhì)經(jīng)GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

人少突膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。但是用特異性免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示的少突膠質(zhì)細(xì)胞，其突起并不少，而且還有許多分支。少突膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能是在中樞系統(tǒng)中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結(jié)構(gòu)、協(xié)助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護(hù)元的正常功能。其異常不僅會導(dǎo)致中樞系統(tǒng)脫髓鞘病變，還會引起元損傷或精神類疾病，甚至可以引發(fā)腦腫瘤。根據(jù)少突膠質(zhì)細(xì)胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質(zhì)細(xì)胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞系統(tǒng)的白質(zhì)的纖維束之間；②細(xì)胞周少突膠質(zhì)細(xì)胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中樞系統(tǒng)的灰質(zhì)區(qū)，常位于細(xì)胞周圍，與細(xì)胞的關(guān)系密切，故又稱為細(xì)胞周衛(wèi)星細(xì)胞（perineuronal-satellite-cell），但在細(xì)胞胞體與此類細(xì)胞之間亦常有星形膠質(zhì)細(xì)胞的薄片狀突起分隔；③血管周少突膠質(zhì)細(xì)胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中樞系統(tǒng)內(nèi)的血管周圍。少突膠質(zhì)細(xì)胞形成的髓鞘膜是為特化和復(fù)雜動物細(xì)胞膜之一，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類脂，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來，發(fā)育學(xué)科進(jìn)展較快，更多的少突膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記物被鑒定出來，如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：