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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎實(shí)質(zhì)采用膠原酶-混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎實(shí)質(zhì)經(jīng)檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腎實(shí)質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Human Renal Parenchymal Cells | 貨號 | YS-01X7249 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟移植是臨床上治療慢性腎功能衰竭的有效方法，然而這種方法受到供體腎短缺的限制。腎細(xì)胞移植可部分解決供體腎短缺的問題，是未來可以替代腎臟移植的有效方法。因此，體外腎細(xì)胞的培養(yǎng)受到國內(nèi)外有關(guān)專家的密切關(guān)注。原代腎細(xì)胞作為一種常用的腎臟毒理學(xué)研究對象，其分離方法主要有機(jī)械研磨分離法和酶消化法，酶消化法因?qū)?xì)胞損傷小、分離效果好而優(yōu)于機(jī)械研磨分離法；目前常用的酶消化法主要是消化法和膠原酶消化法。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
敘利亞倉鼠細(xì)胞系;Syrian Hamster AV12 | Anti-TSHB 促甲狀腺素單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
vaspin(Human Visceral adipose-specific serine protease inhibitor) ELISA Kit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑 96T | Anti-MYL1/MYL2 /FITC 熒光素標(biāo)記肌球蛋白輕鏈1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIMP-1(CT) 金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體(C端) 規(guī)格 0.1ml | CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MBMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
HRH2： 組胺受體H2抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CC16/CCSP 克拉拉細(xì)胞蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
FBXO28： FBXO28蛋白抗體 0.2ml | VCAM-1/CD106 ELISA kit 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | BC-019(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞;P388D1(IL-1) |
人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3 | CD40 Others Mouse 小鼠 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
S100A2 Others Human 人 S100A2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | EGFR Others Mouse 小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HDMEC-c 人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)來自少年者 500,000cells 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | HBEpC Pellet 人支氣管上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人肺動脈成纖維細(xì)胞cDNAHPAF cDNA |
T-108A膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | 人腎實(shí)質(zhì)原代細(xì)胞CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MBMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
CPE Others Human 人 CPE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 |
IFNW1 Protein Human 重組人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白 (His 標(biāo)簽) | HL60細(xì)胞，人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞 大鼠骨髓瘤細(xì)胞,IR983F細(xì)胞 角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基KM |
SERPINB8 Others Mouse 小鼠 SerpinB8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-P-selectin/CD62p /FITC 熒光素標(biāo)記P選擇素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OTP： 螺旋轉(zhuǎn)錄因子OTP抗體 0.2ml | 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293 人腎足突細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
SPECC1L： 細(xì)胞質(zhì)和紡錘體機(jī)化蛋白A抗體 0.2ml | CA8： 酶相關(guān)蛋白8抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/APC APC標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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