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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人腎足突采用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腎足突原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Human Renal Podocyte Cells | 貨號 | YS-01X7272 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人腎足突細(xì)胞分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。足細(xì)胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側(cè)，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難；又由于正常成年機體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突（FP），呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶，從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的后屏障，對于維持腎小球濾過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞 腎癌細(xì)胞,RCC-krause細(xì)胞 SK-HEP-1(肝癌細(xì)胞) | C1q rat (ELISA Kit) 大鼠補體片斷C1q 96T |
RanBP2： RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Rab24 ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HDAC2/HD2/FITC 熒光素標(biāo)記組蛋白去乙酰化酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C9orf86： 9號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRLF1 EBV立即早期基因BRLF1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-c/Troponin T/FITC 熒光素標(biāo)記心肌特異性肌鈣蛋白T抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
雌激素受體α/β抗體 Anti-ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 0.1ml | phospho-AMPK alpha 2 (Ser176)： 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶α2抗體 0.1ml |
小鼠紅白血病細(xì)胞;MEL | CL-0433RWPE-2(人前列腺正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
SL-7細(xì)胞，胚肺細(xì)胞 人前列腺上皮細(xì)胞,RWPE2細(xì)胞 人上皮細(xì)胞;MCF-10A | 魚源細(xì)胞 |
巨噬細(xì)胞生長添加物MGS | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF |
CL-0025AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0076EAC(小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1 正常肝細(xì)胞，L-02細(xì)胞 T24(膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞) | 人腎足突原代細(xì)胞C9orf86： 9號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml |
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr- | L929細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞 3T3-L1(小鼠脂肪細(xì)胞) 小鼠腦瘤細(xì)胞;BC3H1 |
PDCD1 Others Mouse 小鼠 PD1 / PDCD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IL5 Protein Human 重組人 IL5 / Ierleukin 5 蛋白 |
人臍帶單核細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GSK-3β (NT) 糖原合酶激酶-3β抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺平滑肌細(xì)胞裂解物HPSMCL |
EMP-1： 表皮膜蛋白1抗體 0.1ml | Anti-LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 小鼠絨毛膜βMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | 小鼠紅白血病細(xì)胞;MEL |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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